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基因敲除鼠的构建 Trim59+/+ Trim59+/- M 611bp 295bp A B 主要实验方法 诱导获得树突细胞并检测细胞功能 GM-CSF诱导形成树突细胞 小鼠骨髓细胞 细胞形态的观察 TRIM59表达的检测 细胞表面共刺激分子 Wt 40* Wt 100* Hy 40* Hy 100* 诱导分化第四天，细胞明显成团。正在向树突细胞分化 细胞形态 Trim59的表达量 诱导前 诱导后 杂合鼠的表达量约为野生鼠的三分之二 TRIM59对树突细胞的调控作用 Effect of TRIM59 on dendritic cells 全文概述 结论与展望 Trim59对髓系细胞分化的影响 Trim59对Raw264.7细胞的调控 研究背景 Trim59长期观察鼠的炎症情况分析 Trim59基本特征分析 第一部分 研究背景 Trim59家族蛋白 Ring finger E3泛素连接酶 B-box 特征性结构 Coiled-coil Trim 家族蛋白的保守性 Mus chromosome 3 Trim59编码氨基酸的序列 Trim59基因结构 蛋白结构 细胞内的定位 Trim59蛋白结构以及在细胞内的定位 Trim59在不同组织内的表达 第二部分 TRIM59对髓系细胞的调控 Negative Control ：TTCTCCGAACGTGTCACGT Trim59 SiRNA ：CTGCAGAAGTATTATTGAA 慢病毒的构建 酶切 连接 转化感受态细胞 质粒提取 共转293T细胞 病毒的收获和浓缩 滴度测定 载体构建 病毒包装 主要实验方法 建立稳定细胞系检测细胞功能 转染NC及TRIM59 SiRNA 药物筛选获得稳定转染的细胞系 沉默效率的检测 细胞表面分化标记和共刺激分子 细胞因子的检测 RAW264.7细胞 Trim59 GAPDH NC SiRNA SiRNA NC 细胞形态 A B C 细胞形态及沉默效率 NC Trim59 SiRNA 吉姆萨染色 Tunel染色 A cellalone NC-CD14 Trim59siRNA CD14 cellalone NC-CD11b Trim59siRNA CD11b cellalone NC-CD11c Trim59siRNA CD11c cellalone NC-CD40 Trim59siRNA CD40 cellalone NC-CD80 Trim59siRNA CD80 cellalone NC-CD86 Trim59siRNA CD86 B 细胞分化标记和共刺激分子 cellalone NC-PD-1 Trim59siRNA PD-1 cellalone NC-CD127 Trim59siRNA CD127 cellalone NC-CD152 Trim59siRNA CD152 cellalone NC-B7DC Trim59siRNA B7DC cellalone NC-Ly6C Trim59siRNA Ly6C cellalone NC-Ly6G Trim59siRNA Ly6G 炎症因子及其相关蛋白 NC Si p-IKKα/β IKbα p-IKbα β-actin 0 15 30 45 0 15 30 45 NF-kB信号通路 Trim59 CD11c 树突细胞