动物遗传育种学实验 实验三蚕豆染色体组型分析.ppt

遗传育种学实验 中国海洋大学水产学院 实验三、蚕豆染色体组型分析 一、实验目的 掌握染色体制片技术； 了解和认识某一物种染色体组的基本组成和染色体形态特征； 计算染色体组型有关数据。 遗传育种学实验 中国海洋大学水产学院 二、实验原理 遗传育种学实验 中国海洋大学水产学院 各种生物的染色体数目是恒定的，大多数高等动、植物是二倍体，每一个体细胞含有两组同样的染色体，用2n表示。每一个配子带有一组染色体，叫单倍体，用n表示。两性配子结合后，具有两组染色体，成为二倍体生物。 染色体复制后，纵向并列的两个染色单体通过着丝粒联在一起，由于着丝粒在染色体上位置的不同，可以把染色体分成相等或不等的两个臂，造成中部着丝粒染色体，近中着丝粒染色体，近端部着丝粒染色体，端部着丝粒染色体等。有的染色还含有随体或次缢痕。这些染色的特异结构构成一个物种染色体组型。染色体组型分析是细胞遗传学、现代分类学、进化理论的重要研究手段。 染色体分类一般采用Levan提出的标准，按臂比（arm ratio = 长臂长度/短臂长度）将染色体分为四类： 类 型 臂比 中部着丝粒染色体(metacentrics，m) 1.0—1.7 亚中部着丝粒染色体(submetacentrics，sm) 1.7—3.0 亚端部着丝粒染色体(subtelocentrics，st) 3.0—7 端部着丝粒染色体(telocentrics，t) 7—∞ 遗传育种学实验 中国海洋大学水产学院 三、实验材料 蚕豆或洋葱根尖； 细胞中期分裂相显微摄影放大照片 四、实验器具和药品 1. 器材 显微镜，载玻片，盖玻片，恒温水浴锅，温度计，烧杯，指管，镊子，解剖针，染色板，纱布，吸水纸 2. 药品 Schiff试剂，1M HCl，冰乙酸，95%乙醇，70%乙醇，0.1%秋水仙素。 遗传育种学实验 中国海洋大学水产学院 五、实验步骤 1、材料准备 遗传育种学实验 中国海洋大学水产学院 1%秋水仙素溶液（量以浸没其根尖为宜） 用刀片或剪刀将上述处理的根尖剪下1cm左右，卡诺固定液室温固定2－24h，固定液量为根尖材料体积的15倍以上。 用95%乙醇冲洗根尖后置于70%乙醇中0- 4℃冰箱保存1—2年。 遗传育种学实验 中国海洋大学水产学院 植物多采用压片方法制备 从固定液中选取6—8个根尖放在盛有1M HCl的试管中，在60℃水浴中水解8min 水洗2-3次。用刀片或解剖针切取根尖1mm于载玻片上——分割成4—5小块，用针尖拨碎分散开，加一滴苯酚品红染色3-5分钟。 加上盖玻片，用拇指或橡皮头玻璃棒用力均匀地敲打盖片，使根尖细胞成一单层细胞（材料呈云雾状），进行镜检。 2、染色体标本制备 遗传育种学实验 中国海洋大学水产学院 3. 染色体二倍数（2n）的确定 镜下选取50—100个分散良好，形态清晰，数目完整的分裂相。计数每个细胞的染色体数目，找出染色体数目的众数，并计算众数所占百分比，据此确定它的染色体倍数（2n）。 遗传育种学实验 中国海洋大学水产学院 4. 染色体观察 选取5—10个数目完整，分散良好，长度适当（正中期），着丝粒清楚，两条染色体适度分开，形态清晰的分裂相显微拍照. 在照片上记录染色体形态测量数据。首先确认每条染色体的着丝粒位置，以此为界用毫米尺测量染色体的长臂和短臂长度，并参考众数，确定该物种的染色体分类组成。以及观察染色体的其他形态特征，如有无异型染色体对，次缢痕，随体等。 遗传育种学实验 5.核型分析 1、测量染色体长臂长，短臂长，总长。 2、计算臂比，相对长度。 3、根据测量、计算结果将染色体配对、排列。 4.配对原则：臂比，相对长度接近的两条染色体配为一对。 5. 排列：根据染色体相对长度，从长到短依次编号排列，短臂向上，长臂向下。 遗传育种学实验 中国海洋大学水产学院 染色体 长臂相对长度 （X±S.D） 短臂相对长度（X±S.D） 相对全度（X±S.D） 臂 比 随体 有无 分类 1 10.987 9.654 35.66 1.05 无 m 2 9.873 8,173 18.94 1.11 无 m 3 8.762 4.221 16.28 2.03 无 m 4 7.986 3.871 15.75 2.35 无 m 5 7.006 2.578 14.06 3.05 有 sm 6 6.338 1.785 13.77 3.73 有 sm 7 5.732 2.117 12.05 2.55 无 sm 8 4.675 1.975 11.41 2.73 无 sm 9 4.012 1.563 10.97 2.86 无 st 10 3.378 1.231 9.