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黄连解毒汤调控TLR4对MODS胃肠道影响的临床及实验研究 2009届硕士研究生 陈锦河 导师：翁书和 教授 * 前期基础研究 概念 发病机制 诊断标准 流行病学研究 防治进展 * 研究背景 多器官功能障碍综合征（Multiple organ dysfunction syndrome, MODS）多种疾病最终的严重并发症，病死率极高，治疗费用巨大，目前尚无有效的防治方法。据研究报道，MODS的病死率约60%～70%，出现四个器官系统功能衰竭时死亡率高达98%，美国每年约有22.5万例死于MODS，而我国据估计每年约有300万人发生MODS ，如何减少MODS发病率或降低MODS死亡率，成为当前危重病医学所面临的最大挑战。 进一步阐明MODS的发病机制并寻找有效的防治药物，对防治MODS具有重要意义，已成为危重病研究领域的世界性热点课题。近年来通过对中西医结合治疗本病的探索，使MODS患者的病死率显著降低，为解决该医学难题指明了一个重要方向。 * MODS的发病机制十分复杂，目前未能明确，但国内外学者通过20多年的研究和探索，提出了多种有关MODS 发病机制的假说，如“ 缺血再灌注假说”、“胃肠道假说”、“炎症失控假说”、“两次打击或双相预激假说”、“基因调控假说”、“微循环障碍”、“细胞代谢障碍”、“免疫机制障碍”等多种学说。这些假说从不同的侧面阐明了MODS的发病机制，互相之间有一定的重叠和联系。目前较全面和被广泛接受的看法是“双相预激”和“炎症失控”假说。认为两次打击所致的“失控的炎症及免疫反应”可能是MODS发生发展的病理学基础和根本原因。 * 目前研究则多数认为上述机制最终都可能归入全身炎症过度反应或促炎--代偿性抗炎反应平衡失调及免疫抑制，炎症因子的出现被认为可能是这一过程的结果而非最初的启动介质。 * TLRS是近年来发现的感知病原微生物分子识别的一类受体家族,在启动先天性免疫和调节获得性免疫中起着关键作用。它广泛分布于参与机体防御功能的细胞中，在不同组织及器官处的表达量存在差异，其家族成员介导着机体对不同病原微生物的免疫反应。必威体育精装版研究认为TLR4可能是MODS发病机制中的关键启动因子，且TLR4的表达与MODS发病的严重程度可能具有正相关的关系。 研究发现TLR4在MODS大鼠模型中的差异表达比值可达到9.96，居炎症相关基因表达的首位，并可能与动物体内器官组织的功能指标及炎症因子呈现正相关的关系。MODS启动时，细胞外的炎症刺激因子如内毒素脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）等与TLR4结合后将信号转导至细胞内，而后通过髓样分化蛋白88(myeloid differentiation factor 88，MyD88)依赖及非MyD88依赖两条途径，启动炎症反应的发生，最终导致炎症因子的过度表达，进而引起全身组织器官损伤而导致MODS的发生。 * MODS的中医病因病机，目前亦无明确的结论，较早的理论认为其包括毒热证、血瘀证、急虚证、腑气不通证等，MODS的始动因素类似中医学中的“毒邪”。 根据中医关于“毒邪”的理论，王今达等通过实验及临床验证，对中医解毒方药进行了探索，确定了“细菌、内毒素、炎症介质并治”的新理论体系。现代研究证实：清热解毒方药所解之“毒”不仅包括“外源性之毒”－细菌、病毒、内毒素，还能解“内源性之毒”——氧自由基和炎性细胞因子。 * 黄连解毒汤由黄连、黄芩、黄柏、栀子4味中药组成，是清热解毒的代表方之一，具有清热泻火解毒的功效，主治实热火毒、三焦热盛之证。随着现代药理学对该方的不断深入研究，发现黄连解毒汤具有清热、抗炎、抗菌、抗内毒素、逆转细菌及抑制细胞耐药性、抗氧化、改善脑缺血和缺氧等药效学作用。 本研究小组针对MODS的发病机理及黄连解毒汤对MODS的作用进行了相应的临床及动物实验研究。通过在临床及动物实验中观察受试者器官功能损害水平与血清中NF-κβ及其下游炎症介质如TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8、IL-12等表达水平的关系，发现黄连解毒汤可以降低NF-κβ及其下游炎症介质表达水平，并对器官组织具有良好的保护作用。 * 研究目的 1.探讨黄连解毒汤治疗MODS的疗效。 2.探讨黄连解毒汤治疗MODS可能的作用机制, 观察TLR4受体、TNF-α炎症因子表达水平与MODS发生发展的关系及黄连解毒汤的干预结果。 * 研究内容 实验研究部分 1.观察小鼠MODS模型胃肠组织病理改变，包括细胞膜、细胞核、细胞浆的形态，炎症细胞浸润程度等。 2.观察小鼠MODS模型不同时点胃肠组织TLR4基因表