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BIOHIT OYJ
必欧瀚生物技术(合肥)有限公司
项目名称
胃蛋白酶原II(PGII)检测
编写人
批准人
日期
文件号
LOM-4-02-01-01
胃蛋白酶原II(PGII)检测标准操作程序
1 .项目信息
项目名称
英文
PepsinogenII,
英文缩写:PGII
中文
胃蛋白酶原II
检测目的
胃蛋白酶原 II (以下简称 PGII)检测试剂盒采用酶联免疫法(ELISA),定量检测人类血浆或血清样本中的 PGII
检测方法
酶联免疫法(Elisa)
2 项目原理
检测原理
Biohit 的 PGII(ELISA)检测试剂盒采用双抗体(吸附于微孔板上的 PGII特异性捕获抗体和辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗体)夹心法的酶学免疫分析技术
反应过程
第一步
吸附于微孔板表面的 PGII 特异性的单克隆抗体,与样本中的 PGII 分子结合。
第二步
洗板,除去残留样本。
第三步
加入 HRP 标记抗体,与 PGII(抗原抗体结合物)结合。
第四步
再次洗涤后加入 TMB 底物溶液,被酶氧化后显蓝色。
第五步
加入终止液终止酶反应后显黄色。其颜色的深度与 PGII浓度呈正相关。
3.样本采集与处理
3.1病人准备事项
准备事项
具体内容
禁食/特种饮食
测试前饮食清淡
病人的准备事项
采血前 10 小时应保持空腹。
样本采集特殊要求
避免溶血。待测血液必须完全凝固后再分离血清,杜绝混入红细胞,纤维蛋白等,以防止堵塞仪器管道。
3.2样本类型及处理方法
类型
推荐类型
血清
可接受类型
血浆(EDTA)
样本量
最佳量
1.0 ml
最少量
0.5 ml
收集容器
含促凝胶试管、普通试管(不含其它物质)或相应抗凝管
运输容器
带塑胶盖试管
运输要求
在室温条件下运送,可接受冷冻及冷藏取样。
稳定性及储藏要求
室温(18-28?C)
不超过8小时
冷藏温度(2-8?C)
7天
冷冻温度(-20?C)
3个月
时间要求
无
样本拒收及采取措施
拒收严重溶血及被微生物污染的标本
影响/干扰因素
纤维蛋白、严重溶血、脂浊及其它颗粒性物质
其它条件
应避免反复冻融标本
4. 试剂盒组成、试剂的准备及所提供物质的稳定性
所有试剂用量足够于 96 次测试。不同批号试剂盒中的试剂不可混合使用。
4.1 微孔板
组成:12×8 条,共 96 孔,孔内包被有高亲和力的单克隆抗人类 PGII抗体 IgG1。
准备:直接使用。
稳定性:效期内稳定,板条使用后应废弃。
4.2 浓缩洗涤液(10 倍)
组成: 120ml (10 倍稀释后使用)的浓缩磷酸盐缓冲液,含有吐温 20 和 0.1% ProCline 300
为防腐剂。
准备:用蒸馏水将洗涤液稀释 10 倍(如 100ml 洗涤液+900ml 蒸馏水)后混匀使用。
稳定性:稀释后在(2~8℃)冷藏可稳定 2 周。
4.3 稀释液
组成:100ml 磷酸盐缓冲液,含有酪蛋白、吐温 20、0.1% ProCline 300 为防腐剂和
红色染剂。
准备:直接使用。
稳定性:效期内稳定。
4.4 空白液
组成:1.5ml 人类血清基质的磷酸盐缓冲液,含有 0.1% ProCline 300 为防腐剂。
准备:直接使用。
稳定性:效期内稳定。
4.5 标准液
组成:3 瓶 1.5ml 人类血清基质的标准液,含有 0.1% ProCline 300 为防腐剂。每批试剂盒
中 PGII 标准液的浓度约为 6.3μg/l、12.5μg/l、50μg/l,其具体浓度值见瓶签。
准备:直接使用。
稳定性:效期内稳定。
4.6 对照液
组成:1.5ml 人类血清基质的 PGII 对照液,含有 0.1% ProCline 300 为防腐剂。PGII 期望值
见瓶签。
准备:直接使用。
稳定性:效期内稳定。
4.7 酶标液
组成 : 15ml 辣根过氧化物 ( HRP ) 标记单 克隆 抗人 类 PGII 抗体 ,保存在
稳定剂及 0.1%ProCline300的防腐剂中。
准备:直接使用。
稳定性:效期内稳定。
4.8 底物液
组成:15ml 四甲基联苯胺(TMB)溶液,含有防腐剂。
准备:直接使用。
稳定性:效期内稳定,避免阳光直射。
4.9 终止液
组成:15ml 硫酸溶液(0.1mol/l)。
准备:直接使用。
稳定性:效期内稳定。
4.10 封孔膜
3 张孵育用塑料封孔膜。
4.11 使用说明书
5.需要的仪器设备及其他实验用品
·蒸馏水或去离子水
·20~1000μl 移液器及一次性吸头
·1~10ml 移液器
·可吸取 100μl 的 8 通道移液器
·1000ml 量筒
·稀释样本用涡流混匀器
·稀释样本用试管
·洗板机
·纸巾或吸水纸
·计时器
·恒温箱,37℃
·酶
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