必欧瀚生物技术合肥.doc

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BIOHIT OYJ 必欧瀚生物技术(合肥)有限公司 项目名称 胃蛋白酶原II(PGII)检测 编写人 批准人 日期 文件号 LOM-4-02-01-01 胃蛋白酶原II(PGII)检测标准操作程序 1 .项目信息 项目名称 英文 PepsinogenII, 英文缩写:PGII 中文 胃蛋白酶原II 检测目的 胃蛋白酶原 II (以下简称 PGII)检测试剂盒采用酶联免疫法(ELISA),定量检测人类血浆或血清样本中的 PGII 检测方法 酶联免疫法(Elisa) 2 项目原理 检测原理 Biohit 的 PGII(ELISA)检测试剂盒采用双抗体(吸附于微孔板上的 PGII特异性捕获抗体和辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗体)夹心法的酶学免疫分析技术 反应过程 第一步 吸附于微孔板表面的 PGII 特异性的单克隆抗体,与样本中的 PGII 分子结合。 第二步 洗板,除去残留样本。 第三步 加入 HRP 标记抗体,与 PGII(抗原抗体结合物)结合。 第四步 再次洗涤后加入 TMB 底物溶液,被酶氧化后显蓝色。 第五步 加入终止液终止酶反应后显黄色。其颜色的深度与 PGII浓度呈正相关。 3.样本采集与处理 3.1病人准备事项 准备事项 具体内容 禁食/特种饮食 测试前饮食清淡 病人的准备事项 采血前 10 小时应保持空腹。 样本采集特殊要求 避免溶血。待测血液必须完全凝固后再分离血清,杜绝混入红细胞,纤维蛋白等,以防止堵塞仪器管道。 3.2样本类型及处理方法 类型 推荐类型 血清 可接受类型 血浆(EDTA) 样本量 最佳量 1.0 ml 最少量 0.5 ml 收集容器 含促凝胶试管、普通试管(不含其它物质)或相应抗凝管 运输容器 带塑胶盖试管 运输要求 在室温条件下运送,可接受冷冻及冷藏取样。 稳定性及储藏要求 室温(18-28?C) 不超过8小时 冷藏温度(2-8?C) 7天 冷冻温度(-20?C) 3个月 时间要求 无 样本拒收及采取措施 拒收严重溶血及被微生物污染的标本 影响/干扰因素 纤维蛋白、严重溶血、脂浊及其它颗粒性物质 其它条件 应避免反复冻融标本 4. 试剂盒组成、试剂的准备及所提供物质的稳定性 所有试剂用量足够于 96 次测试。不同批号试剂盒中的试剂不可混合使用。 4.1 微孔板 组成:12×8 条,共 96 孔,孔内包被有高亲和力的单克隆抗人类 PGII抗体 IgG1。 准备:直接使用。 稳定性:效期内稳定,板条使用后应废弃。 4.2 浓缩洗涤液(10 倍) 组成: 120ml (10 倍稀释后使用)的浓缩磷酸盐缓冲液,含有吐温 20 和 0.1% ProCline 300 为防腐剂。 准备:用蒸馏水将洗涤液稀释 10 倍(如 100ml 洗涤液+900ml 蒸馏水)后混匀使用。 稳定性:稀释后在(2~8℃)冷藏可稳定 2 周。 4.3 稀释液 组成:100ml 磷酸盐缓冲液,含有酪蛋白、吐温 20、0.1% ProCline 300 为防腐剂和 红色染剂。 准备:直接使用。 稳定性:效期内稳定。 4.4 空白液 组成:1.5ml 人类血清基质的磷酸盐缓冲液,含有 0.1% ProCline 300 为防腐剂。 准备:直接使用。 稳定性:效期内稳定。 4.5 标准液 组成:3 瓶 1.5ml 人类血清基质的标准液,含有 0.1% ProCline 300 为防腐剂。每批试剂盒 中 PGII 标准液的浓度约为 6.3μg/l、12.5μg/l、50μg/l,其具体浓度值见瓶签。 准备:直接使用。 稳定性:效期内稳定。 4.6 对照液 组成:1.5ml 人类血清基质的 PGII 对照液,含有 0.1% ProCline 300 为防腐剂。PGII 期望值 见瓶签。 准备:直接使用。 稳定性:效期内稳定。 4.7 酶标液 组成 : 15ml 辣根过氧化物 ( HRP ) 标记单 克隆 抗人 类 PGII 抗体 ,保存在 稳定剂及 0.1%ProCline300的防腐剂中。 准备:直接使用。 稳定性:效期内稳定。 4.8 底物液 组成:15ml 四甲基联苯胺(TMB)溶液,含有防腐剂。 准备:直接使用。 稳定性:效期内稳定,避免阳光直射。 4.9 终止液 组成:15ml 硫酸溶液(0.1mol/l)。 准备:直接使用。 稳定性:效期内稳定。 4.10 封孔膜 3 张孵育用塑料封孔膜。 4.11 使用说明书 5.需要的仪器设备及其他实验用品 ·蒸馏水或去离子水 ·20~1000μl 移液器及一次性吸头 ·1~10ml 移液器 ·可吸取 100μl 的 8 通道移液器 ·1000ml 量筒 ·稀释样本用涡流混匀器 ·稀释样本用试管 ·洗板机 ·纸巾或吸水纸 ·计时器 ·恒温箱,37℃ ·酶

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