必欧瀚生物技术合肥.doc

BIOHIT OYJ 必欧瀚生物技术（合肥）有限公司 项目名称 胃蛋白酶原II（PGII）检测 编写人 批准人 日期 文件号 LOM-4-02-01-01 胃蛋白酶原II（PGII）检测标准操作程序 1 .项目信息 项目名称 英文 PepsinogenII， 英文缩写：PGII 中文 胃蛋白酶原II 检测目的 胃蛋白酶原 II （以下简称 PGII）检测试剂盒采用酶联免疫法（ELISA），定量检测人类血浆或血清样本中的 PGII 检测方法 酶联免疫法（Elisa） 2 项目原理 检测原理 Biohit 的 PGII（ELISA）检测试剂盒采用双抗体（吸附于微孔板上的 PGII特异性捕获抗体和辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗体）夹心法的酶学免疫分析技术 反应过程 第一步 吸附于微孔板表面的 PGII 特异性的单克隆抗体，与样本中的 PGII 分子结合。 第二步 洗板，除去残留样本。 第三步 加入 HRP 标记抗体，与 PGII（抗原抗体结合物）结合。 第四步 再次洗涤后加入 TMB 底物溶液，被酶氧化后显蓝色。 第五步 加入终止液终止酶反应后显黄色。其颜色的深度与 PGII浓度呈正相关。 3.样本采集与处理 3.1病人准备事项 准备事项 具体内容 禁食/特种饮食 测试前饮食清淡 病人的准备事项 采血前 10 小时应保持空腹。 样本采集特殊要求 避免溶血。待测血液必须完全凝固后再分离血清，杜绝混入红细胞，纤维蛋白等，以防止堵塞仪器管道。 3.2样本类型及处理方法 类型 推荐类型 血清 可接受类型 血浆（EDTA） 样本量 最佳量 1.0 ml 最少量 0.5 ml 收集容器 含促凝胶试管、普通试管（不含其它物质）或相应抗凝管 运输容器 带塑胶盖试管 运输要求 在室温条件下运送，可接受冷冻及冷藏取样。 稳定性及储藏要求 室温（18-28?C） 不超过8小时 冷藏温度（2-8?C） 7天 冷冻温度（-20?C） 3个月 时间要求 无 样本拒收及采取措施 拒收严重溶血及被微生物污染的标本 影响／干扰因素 纤维蛋白、严重溶血、脂浊及其它颗粒性物质 其它条件 应避免反复冻融标本 4. 试剂盒组成、试剂的准备及所提供物质的稳定性 所有试剂用量足够于 96 次测试。不同批号试剂盒中的试剂不可混合使用。 4.1 微孔板 组成：12×8 条，共 96 孔，孔内包被有高亲和力的单克隆抗人类 PGII抗体 IgG1。 准备：直接使用。 稳定性：效期内稳定，板条使用后应废弃。 4.2 浓缩洗涤液（10 倍） 组成： 120ml （10 倍稀释后使用）的浓缩磷酸盐缓冲液，含有吐温 20 和 0.1% ProCline 300 为防腐剂。 准备：用蒸馏水将洗涤液稀释 10 倍（如 100ml 洗涤液＋900ml 蒸馏水）后混匀使用。 稳定性：稀释后在（2～8℃）冷藏可稳定 2 周。 4.3 稀释液 组成：100ml 磷酸盐缓冲液，含有酪蛋白、吐温 20、0.1% ProCline 300 为防腐剂和 红色染剂。 准备：直接使用。 稳定性：效期内稳定。 4.4 空白液 组成：1.5ml 人类血清基质的磷酸盐缓冲液，含有 0.1% ProCline 300 为防腐剂。 准备：直接使用。 稳定性：效期内稳定。 4.5 标准液 组成：3 瓶 1.5ml 人类血清基质的标准液，含有 0.1% ProCline 300 为防腐剂。每批试剂盒 中 PGII 标准液的浓度约为 6.3μg/l、12.5μg/l、50μg/l，其具体浓度值见瓶签。 准备：直接使用。 稳定性：效期内稳定。 4.6 对照液 组成：1.5ml 人类血清基质的 PGII 对照液，含有 0.1% ProCline 300 为防腐剂。PGII 期望值 见瓶签。 准备：直接使用。 稳定性：效期内稳定。 4.7 酶标液 组成 ： 15ml 辣根过氧化物 （ HRP ） 标记单 克隆 抗人 类 PGII 抗体 ，保存在 稳定剂及 0.1%ProCline300的防腐剂中。 准备：直接使用。 稳定性：效期内稳定。 4.8 底物液 组成：15ml 四甲基联苯胺（TMB）溶液，含有防腐剂。 准备：直接使用。 稳定性：效期内稳定，避免阳光直射。 4.9 终止液 组成：15ml 硫酸溶液（0.1mol/l）。 准备：直接使用。 稳定性：效期内稳定。 4.10 封孔膜 3 张孵育用塑料封孔膜。 4.11 使用说明书 5.需要的仪器设备及其他实验用品 ·蒸馏水或去离子水 ·20～1000μl 移液器及一次性吸头 ·1～10ml 移液器 ·可吸取 100μl 的 8 通道移液器 ·1000ml 量筒 ·稀释样本用涡流混匀器 ·稀释样本用试管 ·洗板机 ·纸巾或吸水纸 ·计时器 ·恒温箱，37℃ ·酶