海南大学 食品分析十二 2014.ppt

（4）注意事项 ①此反应的最适反应温度为20-25℃，温度低灵敏度低，并保证标准系列管和样品在相同温度下显色； ②反应温度如果为15-16℃，静置时间需延长为20分钟； ③盐酸副玫瑰苯胺中的盐酸用量对显色有影响，加入盐酸量多，显色浅；加入量少，显色深，所以配制试剂时一定要按操作进行； ④甲醛浓度在0.15-0.25%时，颜色稳定，所以应选择0.2%甲醛溶液； ⑤测定样品颜色较深的样品，可用10%活性炭脱色； ⑥样品加入Na2HgCl4吸收液于100ml容量瓶中加水至刻度，摇匀，此液在24小时内很稳定，否则于4℃可使用一周； ⑦此法测SO2采用HgCl2毒性很强，故实验时应注意安全。 2、蒸馏滴定法 样品中的二氧化硫包括游离的和结合的，加人氢氧化钾使之破坏其结合状态，并使之固定。在密闭容器中对样品进行酸化并加热蒸馏，蒸出二氧化硫，然后用乙酸铅溶液吸收，用浓盐酸酸化，再用碘标准溶液滴定。根据碘标准溶液消耗量计算出样品中二氧化硫的含量。 3、碘量法 样品中的亚硫酸盐在弱酸性条件下加热溢出，用pH6的水承接，然后以淀粉作指示剂，用碘标准溶液滴定至终点，根据碘标准溶液消耗量计算出样品中二氧化硫的含量。 食品中合成着色剂主要是以人工方法进行化学合成的有机色素类，按其化学结构不同可分为偶氮类色素和非偶氮类色素，偶氮类色素按溶解性不同又可分为油溶性和水溶性两类。合成类色素中还包括色淀。 食品中合成着色剂的种类很多，国际上允许使用的有30余种，我国允许使用的主要有苋菜红、胭脂红、赤藓红、新红、玫瑰红、柠檬黄、日落黄、亮蓝、靛蓝等。 六、合成着色剂的测定 1、高效液相色谱法 原理 食品中的合成着色剂经聚酰胺吸附法或液一液分配法提取后，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。 操作步骤： （1）样品处理： ①饮料类：吸取样液50mL于100mL烧杯中（含CO2的加热排除CO2） ②配制酒：吸取样液100mL于200mL烧杯中，加热排出乙醇，加热前放几片碎瓷片。 ③淀粉、软糖、硬糖、蜜饯类：称取粉碎样品5～10g加水30mL，加热溶解，用20％柠檬酸溶液调PH至4左右。 ④奶糖：称取样品 10g粉碎，加 30mL乙醇一氨溶液溶解，置水 浴上加热浓缩到20mL左右，立即用1:10硫酸调至微酸性（用PH 试纸测定），再继续滴加 1mL1:10硫酸，再加 1mL10％钨酸钠溶液使 蛋白质沉淀，过滤、用少量水洗涤，收集滤液备用。 ⑤蛋糕类：称取样品10g，粉碎，加放少量海砂或无水硫酸钠，混匀，用电吹风吹干，加入30mL石油醚搅拌静置片刻，倾出石油醚，如此重复2～3次以除去油脂，再吹干研细，然后转入漏斗中，用乙醇一氨溶液提取色素直至色素提取完全，以下按（4）自“置水浴上加热浓缩至20mL左右”起依法操作。 （2）色素提取： ① 聚酰胺吸附法：样品溶液加 20%柠檬酸调pH为4~6，加热至60 ℃ ，将1g聚酰胺粉加少许水调成糊状，倒入样品溶液中，搅拌片刻，以G3垂融漏斗抽滤，用60 ℃ PH4的水洗涤3～5次，然后用甲醇—甲酸混合液洗涤3～5次（含赤藓红的样品不能洗），再用水洗至中性，用乙醇—氨水—水混合液解吸3～5次，每次5mL，收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至5mL。经滤膜（0.45μm）过滤，取10 μ L进高效液相色谱仪。 ② 液一液分配法（适用于含赤藓红的样品）：将制备好的样品溶液放入分液漏斗中，加 2mL盐酸，三正辛胺正丁醇溶液（5十95）10～20mL，振摇，提取，分取有机相，重复此操作，合并有机相，用饱和硫酸钠溶液洗2次，每次10mL分取有机相，放蒸发皿中，水浴加热浓缩至 10mL，转移到分液漏斗中，加 60mL正己烷，混匀， 加氨水（2＋98）提取2～3次，每次5ml，合并氨水层（含水溶性 酸性色素），用正己烷洗2次，氨水层加乙酸调成中性，水浴加蒸发至近干，加水溶解，定容至5mL。经滤膜（ 0.45μm ）过滤，取10 μ L进高效液相色谱仪。 （3）高效液相色谱分析参考条件： 柱：4.6mmX250mm 10μm，C18不锈钢柱。 流动相：甲醇、0.02mol/L乙酸铵溶液（pH4） 梯度洗脱： 开始：甲醇 ?乙酸铵溶液为20 ? 80； 5min后：甲醇 ?乙酸铵溶液为35 ? 65 10min后：甲醇 ? 乙酸铵溶液为98 ? 2，继续6min 流速：1mL／min。 检测器；紫外检测器，波长254nm。 根据保留时间定性，外标峰面积法定量。 计算： A样——样品的峰面积 A标——标样的峰面积 C标——标样的浓度 V样——样品的定容体积 m样——样品的质量 说明及注意事项 样品在加入聚酰