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一、盐析法
精制抗体的方法很多。一般采用综合技术,避免蛋白变
性。例如分离 IgG 时,多结合使用盐析法与离子交换法,以
求纯化。提取 IgM 的方法也很多,如应用凝胶过滤与制备电
泳法,或离子交换与凝胶过滤等。
原理:
蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团
与水形成水化膜的程度,以及蛋白质分子带有电荷的情况决
定的。当用中性盐加入蛋白质溶液,中性盐对水分子的亲和
力大于蛋白质,于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消
失 。同时,中性盐加入蛋白质溶液后,由于离子强度发生
改变,蛋白质表面电荷大量被中和,更加导致蛋白溶解度降
低,使蛋白分子之间聚集而沉淀。
主要材料
1.试剂:
(1 )正常人混合血清;灭菌生理盐水。
(2 )饱和硫酸铵溶液的配制
称 (NH4 )2SO4 (AR)400-425 克,以 50-80 度之蒸馏水 500ml
溶解,搅拌 20 分钟,趁热过滤。冷却后以浓氨水调 PH 至 7.4。
配制好的饱和硫酸铵,瓶底应有结晶析出。
(3)奈氏试剂配制
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称 HgI 11.5 克,KI8 克,加蒸馏水至 50ml 溶解,搅拌溶解
后,再加入 20%NaOH50ml。
(4 )0.02M,PH7.4 磷酸盐缓冲盐液 (PBS )配制:
A 液:0.2M Na2HPO4:Na2HPO4 ·12H2O 71.64 克,加蒸馏水至
1000ml
B 液:0.2M NaH2PO4:NaH2PO4 ·2H2O 3.12 克 ,加蒸馏水至
1000ml
应用液:取 A 液 81ml 加 B 液 19ml 混合,再以生理盐水作 10
倍稀释即成
(6 )20%磺基水杨酸
2.器材
普通冰箱、离心机、电磁搅拌器,751 紫外分光光度计、扭
力天平、粗天平。透析袋、尼龙绳、细竹棒、精密 PH 试纸
(PH5.5-9.0 )、眼科镊子、小剪刀。烧杯、量筒、吸管、滴
管、灭菌小瓶、试管等。
实验操作
取 1Xml 血清加 1Xml 生理盐水,于搅拌下逐滴加入 2Xml
饱和硫酸铵,硫酸铵的饱和度为
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