紫外分光光度计的使用原理和方法精编版.ppt

二、紫外-可见分光光度计的类型 按其光学系统可分为单波长分光光度计和双波长分光光度计。 1.单波长单光束分光光度计 目前国内广泛采用721型分光光度计。具有结构简单、价格低廉、操作方便、维修也比较容易，适用于常规分析。 单波长单光束分光光度计还有国产751型、XG-125型、英国SP500型和伯克曼DU-8型等。 2.单波长双光束分光光度计 单波长双光束分光光度计有国产710型、730型、740型、日立UV-340型等就属于这种类型。 3.双波长分光光度计 双波长分光光度计的优点：是可以在有背景干忧或共存组分吸收干忧的情况下对某组分进行定量测定。 国产WFZ800-5型、岛津UV-260型、UV-265型等。 三、分光光度计的校正和检验 1.波长校正 2.吸光度校正 3.杂散光的检验 4.稳定性的检验 §4 分析条件的选择 一、 仪器测量条件的选择 1.适宜的吸光度范围 由朗伯-比尔定律可知： A=lg1/T=εcl 微分后得： dlgT=0.4343dT/T= -εldc 或 0.4343ΔT/T= -εlΔc 代入朗伯-比尔定律有： Δc/c=0.4343ΔT/TlgT 要使测定的相对误差Δc/c最小，求导取极小得出： lgT=-0.4343=A 即当A=0.4343时，吸光度测量误差最小。 最适宜的测量范围为0.2~0.8之间。 通常是根据被测组分的吸收光谱，选择最强吸收带的最大吸收波长为入射波长。当最强吸收峰的峰形比较尖锐时，往往选用吸收稍低，峰形稍平坦的次强峰或肩峰进行测定。 2.入射光波长的选择 3．? 狭缝宽度的选择 为了选择合适的狭缝宽度，应以减少狭缝宽度时试样的吸光度不再增加为准。一般来说，狭缝宽度大约是试样吸收峰半宽度的十分之一。 对多种物质进行测定，常利用显色反应将被测组分转变为在一定波长范围有吸收的物质。常见的显色反应有配位反应、氧化还原反应等。 二、显色反应条件的选择 这些显色反应，必须满足以下条件： 4.反应生成物的组成恒定。 3. 反应生成的产物有足够的稳定性，以保证测量过程中溶液的吸光度不变； 2．反应有较高的选择性，即被测组分生成的化合物吸收曲线应与共存物质的吸收光谱有明显的差别； 1．反应的生成物必须在紫外-可见光区有较强的吸光能力，即摩尔吸光系数较大； 1．酸度 显色反应最适宜的酸度范围可通过实验来确定：测定某一固定浓度的试样的吸光度随酸度的变化，以吸光度为纵坐标，溶液的PH值为横坐标作图。 3.显色时间和温度 2.显色剂的用量 测定试样溶液的吸光度，需先用参比溶液调节透光度（吸光度为0）为100%，以消除其它成分及吸光池和溶剂等对光的反射和吸收带来的测定误差。 三、参比溶液的选择 参比溶液的选择视分析体系而定，具体有： 1．溶剂参比 试样简单、共存其它成分对测定波长吸收弱，只考虑消除溶剂与吸收池等因素； 2．试样参比 如果试样基体溶液在测定波长有吸收，而显色剂不与试样基体显色时，可按与显色反应相同的条件处理试样，只是不加入显色剂。 3．试剂参比 如果显色剂或其它试剂在测定波长有吸收，按显色反应相同的条件，不加入试样，同样加入试剂和溶剂作为参比溶液。 4. 平行操作参比 用不含被测组分的试样，在相同的条件下与被测试样同时进行处理，由此得到平行操作参比溶液。 §5 测定方法 一、 单组分定量方法 单组分是指样品溶液中含有一种组分，或者是在混合物溶液中待测组分的吸收峰与其他共有物质的吸收峰无重叠。 其定量方法包括校准曲线法、标准对比法和吸收系数法。 1 校准曲线法 方法：配制一系列不同含量的标准溶液，选用适宜的参比，在相同的条件下，测定系列标准溶液的吸光度，作A-c曲线，即标准曲线，也可用最小二乘数处理，得线性回归方程。 在相同条件下测定未知试样的吸光度，从标准曲线上就可以找到与之对应的未知试样的浓度。 2 标准对比法 即将待测溶液与某一标样溶液，在相同的条件下，测定各自的吸光度，建立朗伯-比尔定律，解方程求出未知样浓度与含量。 As=Kcs Ax=Kcx 例1.血清铜的测定 例2.新生儿血清胆红素的测定 §6 紫外-可见分光光度法在医学检