细胞培养基配方.doc

任何与精液的生成或运输有关的器官和部位发生感染时，精液均可染菌。前列腺炎与精囊腺炎的致病菌有葡萄球菌、链球菌，大肠杆菌、类白喉杆菌J尿道炎常见致病菌有淋病双球菌，大肠杆菌、链球菌、葡萄球菌l附睾炎最常见的致病菌为结核杆菌和淋病双球菌，其次为大肠杆菌，葡萄球菌．．链球菌等。通过对精液进行涂片或培养检查，能及时发现上述致病菌。 ??? (一)标本收集清洁尿道外口(包皮过长者应翻起)，用无菌等渗盐水反复冲洗，然后用按摩和手淫法将精液射入无菌瓶中。 ??? (二)涂片检查将精液涂于载玻片上，干后通过火焰数次固定，分别作革兰氏染色及抗酸染色后镜检。 ??? 1．革兰氏染色法 ??? 【试剂】 ??? (1)结晶紫染液：称取结晶紫4～8 g，溶于95％酒精100ml中，制成饱和液；再取饱和液20m1与lOg／L的草酸铵溶液80ml混合即成。 ??? (2)卢戈氏碘液：先溶碘化钾2 g于lOml蒸馏水中，再加碘1g；待碘全部溶解后，加蒸馏水200ml即成。??? ??? (3)脱色剂：96％酒精或丙酮乙醇溶液(95％乙醇70ml，加丙酮30m1)均可应用。但后者较单用95％酒精好，易于掌握，反应准确。 ??? (4)复染液：可用稀释石炭酸复红液(取萋一尼氏抗酸染色液中的石炭酸复红液lOml，加蒸馏水90ml即成)或沙黄溶液(25g／L的沙黄乙醇溶液10ml，加蒸馏水90m1)。 ??? 【操作】将结晶紫染液滴加在已固定的涂片上，染1分钟后，流水冲洗；滴加卢戈氏碘液1分钟后水洗，再用脱色剂脱色，摇动玻片至紫色不再脱落为止；水洗；加稀释石炭酸复红液染30秒～1分钟；流水冲洗，晾干后镜检。 ??? 【结果】精液涂片中革兰氏阳性菌染成紫色，革兰氏阴性菌染成红色。? ，。 ??? 【注意事项】? 新配制的染液应先用已知的革兰氏阳性和阴性菌(如金黄色葡萄球菌与大肠杆菌)作对照，以检查染液的质量。结晶紫与草酸铵溶液混合后不能保存太久；如有沉淀出现应重新配制。 ? 2．抗酸染色法 ? 【试剂】 ? (1)Ziehl氏石炭酸复红液：称取碱性复红4 g，溶于95％酒精lOOml内即成碱性复红饱和酒精溶液。取该饱和液100ml，与50g／L的石炭酸水溶液90ml混匀即成。 ??? (2)3％盐酸酒精：取浓盐酸3ml加915％酒精97ml混匀。 ??? (3)吕弗勒(Loeffler)氏碱性美蓝溶液：称取美蓝(亚甲蓝)2g，溶于95％酒精lOOml中制成饱和液；再取饱和液30ral加入蒸馏水100ml及lOOg／L的氢氧化钾水溶液O．1mI即成。 ??? 【操作】? 用片夹夹住精液涂片，滴加ziehl氏石炭酸复红溶液，以微火加热，保持染液冒蒸汽，切勿煮沸、烧干。染液要干时随即添加，如此维持5分钟；冷却后，以流水从玻片背面冲洗掉多余的染料，滴加3％盐酸一酒精脱色，至玻片上几无红色为止；水洗后以碱性美蓝液复染1分钟；水洗，待干，油镜检查。 ??? 【结果】抗酸杆菌染成红色，非抗酸菌或细胞均染成蓝色。 ??? 【注意事项】石炭酸一复红加温染色过程中，温度不宜过高，切勿使染料沸腾和蒸发干；如急于观察结果，可将染色后标本用吸水纸平铺于玻片上，轻压吸干，但用过的吸水纸上可能沾有极少量染色的抗酸杆菌，故不宜再用于吸干第二份标本，以免发生错误诊断。 ??? 2006-12-8 16:04:00 袁渭清 等级：版主 文章：77 积分：663 门派：无门无派 注册：2006年10月16日 第 2 楼 ? ?(三)精液的细菌培养 ??? 1．常用培养基 ??? (1)血液琼脂(血平板)： ??? 【配方一】??? 、 ??? 成分：普通营养琼脂90rot；脱纤维羊血(或兔血)10ml,， ??? 制法：将已灭菌的普通营养琼脂(pH7．6加热融化；冷却至50℃左右，以无菌手续加入lOm]脱纤维羊血(临用前置37℃水浴箱预温)，轻轻摇匀(勿使有气泡)，倾注于灭菌平皿内，每一平皿(直径9 cm)13～15ml或分装试管，制成斜面；待凝固后，抽样置37℃培养18～24h，观察有无细菌生长；如无菌生长，置4℃备用。 ??? 【配方二】 ??? 成分：肉膏汤(pH7．8)800ml；硫酸镁(493g／L)8 ml；脱纤维羊血80ml；琼脂21～23g；5．0g／L对氨基苯甲酸8 ml。 ??? 制法：将肉膏汤置三角烧瓶内，加入硫酸镁、对氨基苯甲酸及琼脂，混合并使液体浸湿琼脂，121．3℃高压灭菌30分钾，取出冷至50℃左右，以无菌手续加入37℃水浴预温的无菌脱纤维羊血或兔血，轻轻摇匀，倾注平板，凝固后，抽样置37℃培养18～24h，如无菌生长冷藏备用。 ??? (2)巧克力色血琼脂(巧克力平板)： ??? 成分：与血琼脂配方相同。 ??? 制法：与血琼脂相同，但于培养基中加入血液混匀后，须