免疫胶体金技术和正向间接血凝检测技术.pdf

免疫胶体金技术和正向 间接血凝检测技术 一、猪瘟概述 猪瘟 （Classical Swine Fever ，CSF ；Hog Cholera ，HC） 又名猪霍乱、烂肠瘟，是一种高度接触性传染病，遍及全世 界，是目前危胁养猪业重要的疫病之一。世界动物卫生组织 （OIE ）将此病死为A类动物疫病之一，我国将此病列为一类 动物疫病。 猪瘟能引起猪的大批死亡、母猪的繁殖障碍、继发感染 等，危害级大。国家中长期动物疫病防治规划 （2012—2020 年）将此病列为优先防治的5个动物疫病之一。 （FMD 、CSF 、HP-P S、ND 、HPAI ） 《动物检疫检验技术专业教学资源库》 二、猪瘟抗体检测的意义 1. 确定是否需要免疫 Ab ≥24 可以获得保护 Ab 24 不能获得保护 2. 确定免疫效果： （时间、疫苗、剂量、免疫抑制病） 3. 用于猪瘟的临床诊断 4. 非免疫无规定疫病 （猪瘟）的确认 《动物检疫检验技术专业教学资源库》 三、检测样本的制备 （一）血清的制备： 1. 采血：1-2ml （约0.5ml血清） 2. 凝固析出血清，不能出现溶血情况 3. 补体的灭活：检测前，56 ºC水浴，灭活30min 《动物检疫检验技术专业教学资源库》 库》 前腔静脉采血：适合所有年龄的猪。 《动物检疫检验技术专业教学资源库》 《动物检疫检验技术专业教学资源库》 耳静脉采血： 用手压迫耳根静脉血管或用橡皮带绕耳基部环 扎，使耳静脉怒张，适合大猪。 专业教学资源库》 （二）猪唾液的提取 利用猪的唾液检测抗原或抗体，是一种较有发展前景的检 测方法。 1.唾液的提取： 用一灭菌纱布悬挂于猪舍，猪会好奇咀嚼， 纱布吸取猪的 唾液。 2.将纱布中的唾液挤出至灭菌烧杯或离心管中 3.离心：10000转/分钟，离心1分钟，取上清液 4.进行抗原检测或抗体检测 《动物检疫检验技术专业教学资源库》 注意： 唾液抗体与血清抗体不是一个概念。引入相对 抗体概念 相对抗体指用同一种方法检测出血清抗体和唾 液抗体量的相对大小 （用%表示）。 相对抗体的修正参数是建立在大量检测数据基 础上的，这些必须包括完全阴性值、低抗体滴度 值、中抗体滴度值、高抗体滴度值 《动物检疫检验技术专业教学资源库》 四、猪瘟抗体检测的方法 1. 正向间接凝集试验 2. 猪瘟抗体检测试纸卡 （胶体金技术） 3. 酶联免疫吸附试验 （ELISA ） 《动物检疫检验技术专业教学资源库》 五、优缺点 《动物检疫检验技术专业教学资源库》 方法一：猪瘟正向间接凝集试验 《动物检疫检验技术专业教学资源库》 猪瘟正向间接凝集试验 （一）试验原理 （二）适用范围 （三）试验器材 （四）试验方法 （五）结果判定 （六）注意事项 《动