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卷 期 生 物 工 程 学 报
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年 月
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利用同源重组建立地中海拟无枝菌酸菌!# 染色体的
基因置换$ 中断系统
丁晓明 张 霓 田永强 姜卫红 赵国屏 焦瑞身
(中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所,上海 $%%%0$ )
摘 要 地中海拟无枝菌酸菌 是力复霉素 的工业产生菌,其遗传操作一直是一个难题。在该菌株 高
H0$ I’ J+K
效电转化的基础上,利用同源重组的原理,建立了地中海拟无枝菌酸菌染色体的基因置换L 中断系统。通过大肠杆
菌重组质粒 构建、转化及两步重组筛选,成功地用 淀粉酶基因( )取代了地中海拟无枝菌酸菌 染
CJM!!% / +32 H0$
!
色体上的 氨基 羟基苯甲酸合成酶基因( )。第一步单交换和第二步双交换的频率分别是 和
0/ /2/ +4+ % N2 O P % N O
$ O 。将质粒CJM!!% 变性后转化可显著提高重组频率,在第二步筛选双交换前对单交换重组子进行电击也能够提
高其双交换重组的频率。此外,通过转化构建的两端带同源区段的线性J+K 片段及一步重组筛选,我们在地中海
拟无枝菌酸菌 染色体的 , 基因中间插入了阿普拉霉素抗性基因( ),其效率约为 转化子
H0$ +3*5 *#- 6 +7 * 0% P 2% L
?J+K。
关键词 地中海拟无枝菌酸菌,同源重组,基因置换L 中断
中图分类号 文献标识码 文章编号 ( )
Q# K !%%%/0%5! $%%$ %#/%#0!/%
力复霉素( )是一种安莎类( 节基因或限速酶进行功能分析,构建工业高产菌。
R;S7:.D; KB7:./
D;B)抗生素,由革兰氏阳性菌地中海拟无枝菌酸菌 上述研究的开展,需要用到染色体基因阻断L置
( )产生,可治疗由分枝杆菌 换技术。在抗生素产生链霉菌的遗传工程中,这被
8320(,+/(7# 3%9#/%**+$%#
( )和肺炎球菌( )引起的各 证明是一种非常有效的方法。然而,由于力复霉素
T.D(G7DU4A;-: V4-:(D(DD-B
[]
种病症! ,具有良好的疗效,并且在抑制肿瘤方面亦 产生菌8320(,+/(
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