全血基因组DNA提取试剂盒使用说明书磁珠法.doc

组织（细胞）核酸提取试剂盒（磁珠法） 江苏昱安生物科技有限公司 组织（细胞）核酸提取试剂盒（磁珠法） 使用说明书 【产品名称】 通用名称：组织（细胞）核酸提取试剂盒（磁珠法） 英文名称：Nucleic Acid of Tissue and Cell Extraction Kit (Magnetic Bead Method) 【包装规格】50T/盒(Cat#Yu-TN02-1) 【预期用途】组织（细胞）核酸提取试剂盒（磁珠法）用于从动物组织、培养细胞中分离纯化出高质量、高浓度的核酸。本产品不直接用于临床诊断。 【检验原理】裂解吸附液使细胞裂解释放出核酸，并且促使核酸与蛋白质分离，在裂解吸附液高盐低pH的环境下，磁珠表面的硅胶高效吸附释放的核酸。磁珠洗涤后去除蛋白等污染物，在洗脱液低盐高pH值的情况下，硅胶释放吸附的核酸，从而达到快速分离纯化核酸的目的。 【主要组成成分】 产品编号 试剂名称 组成成分 数量 Cat#Yu-TN02-1 50T/盒 裂解吸附液 Tris，异硫氰酸胍，表面活性剂 25mL×1瓶 RNA保护剂 RNase抑制剂 0.5mL×1支 Buffer AW1 Tris，氯化钠 12mL×2瓶 Buffer AW2 Tris 9mL×2瓶 磁珠 1mL×1支 洗脱液B Tris 5ml×1瓶 使用说明书 1份 【贮藏与有效期】裂解吸附液A 和Buffer AW1常温避光保存；RNA保护剂常温运输，-20℃避光保存（收货后应立即放入-20℃保存）；其它成分常温保存。有效期1年。 【适用仪器】手工操作 【自备试剂】无水乙醇，异丙醇 【样本要求】液氮中保存的组织。常温置于组织保存液中7天内的组织；置于组织保存液中-20℃长期保存的组织。新鲜的细胞标本；常温置于组织保存液中7天内的细胞；置于组织保存液中-20℃长期保存的细胞。 【检验方法】 1．裂解吸附液B的配制：使用前按标本数吸取相应体积的裂解吸附液A，每500μL裂解吸附液A中加入10μL RNA保护剂，闭盖，3000rpm振荡混匀15秒，瞬时离心，配成裂解吸附液B。 2．样本处理 2.1液氮中保存的组织：将组织标本在液氮中磨成粉末后，使液氮充分挥发。再以20-30mg组织中加入0.5mL裂解吸附液B，使用匀浆器继续充分匀浆。10,000×g离心30秒，吸取400μL上清至1.5mL离心管中。以下进入步骤3。 注：1、样品总体积不能超过所用裂解吸附液的10%。2、0.5mL裂解吸附液最大裂解50mg组织，最佳裂解20-30mg组织；3、组织匀浆必须充分，确保RNA的提取效率。4、匀浆过程中会产生泡沫，需要离心消除泡沫和组织残渣。 2.2 组织核酸保存液（或RNA later）保存的组织：用RNase-free的镊子取出组织核酸保存液（Cat#Yu-TP01）或RNA later保存的组织（冷冻的保存液需37℃振荡孵育至保存液完全融化），放入1.5mL离心管中，称重。加入1mL75%乙醇漂洗1次，充分吸弃75%乙醇。每20-30mg组织中加入0.5mL裂解吸附液B，使用匀浆器充分匀浆。10,000×g离心30秒，吸取400μL上清转入至1.5mL 离心管中。以下进入步骤3。 注：1、样品总体积不能超过所用裂解吸附液的10%。2、0.5mL裂解吸附液最大裂解50mg组织，最佳裂解20-30mg组织；3、组织一旦放入裂解吸附液中，匀浆一定要迅速进行。4、组织匀浆必须充分，确保RNA的提取效率。5、匀浆过程中会产生泡沫，需要离心消除泡沫和组织残渣。 2.3 贴壁生长细胞：在指数生长期，弃去细胞培养液，在10cm2的培养板中直接加入0.5mL裂解吸附液B，反复吹打使细胞悬浮，吸取400μL细胞悬浮液转入至1.5mL 离心管中。以下进入步骤3。 注：0.5mL裂解吸附液最佳裂解105-7个细胞；指数生长期时10cm2的培养板中的细胞总数一般为105-7个细胞；如果使用更大面积的培养板，裂解细胞时需要增加裂解吸附液的使用量。 2.4 培养细胞悬液：在1.5mL离心管中加入1mL处于指数生长期的培养细胞悬液（或者已计数的细胞悬液），1,000rpm离心3分钟，弃上清。在细胞沉淀中加入400μL裂解吸附液B。以下进入步骤3。 注：0.5mL裂解吸附液最佳裂解105-7个细胞；处于对数生长期的细胞数量一般为105-7个细胞/mL。 2.5 组织核酸保存液（或RNA later）保存的细胞：取出组织核酸保存液（Cat#Yu-TP01）或RNA later保存的细胞（冷冻的保存液需37℃振荡孵育至保存液完全融化），取适量转入1.5mL离心管中。加入2倍体积的TE（pH8.0），5,000×g离心10分钟。弃取