我国生产用卡介菌的传代稳定性.docx

·1102· 中国生物制品学杂志 2009 年 11 月第 22 卷第 11 期 Chin J Biologicals November 2009，Vol. 22 No. 11 中国图书分类号 Q933 文献标识码 A 文章编号 1004-5503（2009）11-1102-04 【预防制品】 我国生产用卡介菌的传代稳定性 赵爱华 乔来艳 贾淑珍 寇丽杰 王国治 【 摘要 】 目的 研究我国生产用卡介菌上海株在传代过程中分子遗传学特性的稳定性。方法 应用多重 PCR 法，对我国 生产用卡介菌上海株工作种子批及其不同代次菌的各缺失区、插入序列 IS6110 及基因座 SenX3-RenX3 串联重复序列拷贝数进 行检测。结果 我国生产用卡介菌上海株的工作种子批及其第 6、9、12 代菌均缺失 RD1、RD2，未缺失 RD8、RD14、RD16、nRD18 及 RDDenmark ／ Glaxo；含有 1 个 IS6110 插入序列和 3 个 SenX3-RenX3 基因座串联重复序列。结论 我国生产用卡介菌上海株 在传 12 代以内，其分子遗传学特性是稳定的。 【关键词】 卡介菌上海株；遗传学特性；传代；稳定性 Genetic Stability during Subculture of BCG for Vaccine Production in China ZHAO Ai-hua, QIAO Lai-yan, JIA Shu-zhen, et al （National Institute for the Control of Pharmaceutical and Bio－ logical Products, Beijing 100050, China） 【Abstract】 Objective To study the stability of molecular genetic characters during subculture of BCG China strain for vaccine production in China. Methods The region of deletion（RD）, copy numbers of IS6110 and variable number tandem repeat sequences （VNTRs）at SenX3-RenX3 locus in working seeds and various passages of BCG China strain were tested by multiplex PCR. Results Both RD1 and RD2 were deleted in working seeds and passages 6, 9 and 12 of BCG China strain, while RD8, RD14, RD16, nRD18 and RDDenmark ／ Glaxo were undeleted. The working seeds and various passages of BCG China strain contained one IS6110 and 3 VNTRs at SenX3-RenX3 locus. Conclusion The molecular genetic characters of BCG China strain was stable within 12 pas－ sages. 【Key words】 BCG China strain; Genetic character; Subculture; Stability 我国皮内注射用卡介苗生产用菌种为卡介菌 D2PB302 株，系丹麦国立血清研究所 BCG-823 株的 子代菌株。其生产过程中传代采用种子批系统，即原 代种子批、主种子批及工作种子批。《中国药典》三部 （2005 版）中规定，卡介苗菌体的培养由工作种子批 至单批培养物，收获的总传代数不得超过 12 代。基 于目前生产工艺的特点，菌种传代方式允许工作种 子批的横传。 为了解我国生产用卡介苗菌种上海株在传代过 程中分子遗传学特性的变化，本研究分别对其第 6、 9、12 代 菌 的 缺 失 区（RD1、RD2、RD8、RD14、RD16、 nRD18、RDDenmark ／ Glaxo）、插入序列 IS6110 及基 因座 SenX3-RenX3 串联重复序列拷贝数进行检测， 并与工作种子批进行比较，现将结果报道如下。 1. 材料与方法 1. 1 菌株 卡介菌巴斯德株（BCG Pasteur 1173P2）由中国 药品生物制品检定所保存；生产