分子病理学常用研究技术原理及应用.pptxVIP

分子病理学常用研究方法原理及选择;实验方法在科研工作中的意义;工欲善其事必先利其器;选择实验方法的基本原则;1．为没有工作经验的医学研究生编写一本适合自学的手册式教材，为他们做课题时更快、更好地选择合适的实验技术提供决策参考。2．重点介绍同类实验技术的发展沿革、优劣比较；不同实验技术的特点、用途、相互关系、发展趋势；各类实验技术的关键、操作要点和选择示范。3．重点强调医学实验技术的原理与选择，而非具体操作，亦非理论知识。;常用医学实验动物模型的种类及选择;分子病理学常用实验方法;组织取材;细胞标本一般处理流程;;组织固定;组织固定的方法;常用固定剂;组织病理制片技术 ;组织病理制片技术 ;;组织病理制片技术 ;细微：微米、纳米级切割 原位：所取材料定位清楚 同质：所取材料在一定层次上相同 结合：与其他实验技术结合;显微切割本身不能对样品进行研究，必须同其他实验技术结合，其切割目标完全取决于研究目的 ;显微切割的方式 ;全自动组织处理机;石蜡切片机;常用组织切片染色方法 ;特殊染色;结缔组织染色 ;来源于间胚叶的肿瘤如纤维瘤、平滑肌瘤、横纹肌瘤、神经纤维瘤及其肉瘤等的诊断和鉴别诊断。 在慢性炎症、机化和瘢痕形成等病变中显示胶原纤维，如慢性肾小球肾炎的肾小球纤维化、大叶性肺炎、血栓机化、风湿性肉芽肿时Aschoff’s巨细胞消失、胃、十二指肠溃疡愈合、慢性阑尾炎、肝硬化。 血管壁的胶原纤维染色对病理诊断有重要意义。如良性高血压的小动脉玻璃样变（V.G阳性）；恶性高血压小动脉管型纤维素样坏死（V.G阴性而纤维素染色阳性）；高血压性肾固缩，其小动脉V.G阳性呈红色，而淀粉样物质沉积的小动脉壁V.G染色呈黄色 ;结缔组织染色 ;结缔组织染色 ;常用于区别癌和肉瘤：癌巢周围常有网状纤维包裹；用于基底膜染色，鉴别原位癌或原位癌早期浸润。 鉴别血管内皮瘤和外皮瘤：血管内皮瘤瘤细胞呈泡巢状，周围被网状纤维包绕；血管外皮瘤瘤细胞间可见较多网状纤维。 区别脑肿瘤：脑原发性肉瘤周围有较多网状纤维、脑血管周围肉瘤组织内有较多网状纤维，其??脑肿瘤少见网状纤维 ;结缔组织染色 ;弹力纤维增生：原发性或继发性高血压的小动脉、皮肤弹力纤维瘤、老年弹力纤维增生症、心内膜弹力纤维增生症、乳腺癌的弹力纤维增生等。 弹力纤维断裂、崩解：老年性肺气肿、主动脉粥样硬化、梅毒性主动脉炎、皮肤环状肉芽肿等。;肌肉组织染色 ;脂类染色 ;胆固醇及胆固醇酯染色 ;磷脂染色 ;糖原染色 ;该方法对含乙二醇基或氨羟基的多糖呈阳性反应 急性心肌缺血时心肌糖原消失，饥饿时肝糖原减少，糖尿病时肝、肾、肾曲小管可出现大量糖原;色素染色 ;神经组织染色 ;神经轴突染色 ;神经髓鞘染色;神经胶质细胞染色 ;核酸及核蛋白染色体染色 ;病理内源性沉着物染色 ;病原微生物染色 ;原位蛋白质检测 ;免疫组织化学 ;膜阳性;IHC的基本知识 ;多克隆抗体（polyclonal antibody, pAb）;单克隆抗体（monoclonal antibody,mAb）;基因工程抗体 ;抗体标记 ;荧光标记物 ;酶标记物 ;酶标记物 ;碱性磷酸酶(AKP) ;葡萄糖氧化酶（glucoseoxdase，GOD） ;亲和组织化学标记物 ;生物素－亲和素系统 ;;常用抗体标记技术比较 ;IHC主要染色方法及原理 ;直接法（direct method） ;间接法（indirect method） ;非标记抗体法 ;亲和素-生物素法 ;亲和素-生物素法 ;EnVision法 ;催化放大系统（catalyzed signal amplication, CSA法） ;常用IHC方法比较 ;IHC主要方法演进示意图 ;酶组织化学技术 ;酶组织化学技术 ;酶组织化学技术 ;原位核酸检测;原位核酸检测;原位杂交：in situ hybridization ;组织切片预处理 ;探针的标记;探针的标记;杂交;ISH的应用;荧光原位杂交－FISH ;FISH的探针;将已知碱基序列的特异DNA片段作为探针，标记上不同荧光素，与靶核酸进行DNA-DNA原位杂交，可在荧光显微镜下直接观察结果;间接法FISH ;FISH的应用;原位PCR ;原位PCR的分类 ;直接法原位PCR;间接法原位PCR;原位反转录PCR;原位再生序列复制反应(self-sustained sequence replication reaction) ;原位PCR的不足 ;引物介导的原位标记技术 ;;组织图像采集与分析;谢 谢