非细胞型生物.pptxVIP

●病毒发现的历史Ivnowsky (1892): TMVBeijerinck (1898)： ‘ filterable virus’Loeffler（1898）口蹄疫病毒Towort（1915）噬菌体非细胞生物： ----真病毒 ----亚病毒： 类病毒、拟病毒、朊病毒§1 . 病毒（真病毒）●病毒 病毒是一类核酸和蛋白质等少数几种成分组成的超显微非细胞生物，本质是一种只含DNA或RNA的遗传因子，能以感染态和非感染态两种状态存在。 病毒的分类：●寄主： 动物病毒、植物病毒、噬菌体●遗传物质： DNA病毒、RNA病毒、●形态： 杆状 (螺旋状）、多面体、复合型●病毒的特征 1.形态极其微小 2.无细胞构造的分子生物 3.只含一种核酸4.高度的寄生性5.通过装配方式进行繁殖6.离体可保持长期的侵染活性7.对抗生素通常不敏感8.有些能够整合到寄主的基因组中●病毒与人类：1）病毒对人类健康的危害2）对人类生活的影响2）病毒作为分子生物学研究的工具： ----DNA是遗传物质的证明 （噬菌体感染实验） ----遗传物质转移的载体 ----蛋白质工程（噬菌体展示技术)建议读物：H5N1型禽流感病毒（蓝色）正攻击红色细胞 疯牛病HIV一、形态构造与化学成分 （一、大小）病毒的计量 单位： nm病毒的基因组：Qβ：3个基因（二）病毒粒子结构与组成 壳粒：构成病毒外壳的形态亚单位。核心：由DNA或RNA构成 核衣壳（基本 构造 ）衣壳：由许多衣壳粒蛋白构成病毒粒子 包膜 （非基本构造）：由类脂和糖蛋白构成,有的带有刺突 流感病毒刺突 血凝素蛋白：与宿主唾液酸结合 神经氨醇酶：帮助病毒进入宿主 ●病毒的群体形态 1、包涵体（病毒）：昆虫病毒在宿主细胞内聚集而成的晶体结构。2、噬菌斑 3、空斑4、枯斑（组织坏死） 蚀（噬）斑测定（plaque assay）： （病毒感染性作为病毒数目测定的依据） 在生长的宿主表面，铺上细菌或动物病毒，在单层细胞上形成的蚀（噬）斑，可以认为由单个病毒增殖产生的。由此，可以通过蚀（噬）斑形成单位(pfu)来计算单位体积样品中病毒的数量。 （三）病毒核酸（基因组）– – dsDNA/ssDNA dsRNA/ssRNA– – 线状/环状， 闭环/缺口环– – 单分子/双分子 /三分子/多分子●HBV（人乙肝病毒）的缺口环●多分子基因组（流感病毒）（四）噬菌体形态1、噬菌体的模式结构：T偶数噬菌体头部：颈部：尾部： 尾鞘、 尾管、 基板、刺突、 尾丝、 ●噬菌体形态二、病毒的繁殖方式 （一）噬菌体●烈性噬菌体 感染后短时间内能连续完成繁殖过程而使宿主细胞裂解的噬菌体。●温和噬菌体 感染后其基因组整合到宿主的基因组上，并随宿主基因组的复制而同步，而不引起宿主细胞的裂解的噬菌体。●繁殖过程（烈性噬菌体）：1）吸附：尾丝与宿主表面特异受体结合2）侵入：溶菌酶水解肽聚糖，核酸进入宿 主细胞。3）增殖：控制细胞代谢系统，合成噬菌体 的各种 “部件”。 增殖过程的3阶段： 1）早期转录-翻译：2）次早期转录-翻译3）晚期转录-翻译4）成熟：自装配过程。5）释放：多种酶类作用，促进细胞裂解，释放子代噬菌体。 ●噬菌体的测定(效价的测定)效价:生物制品活性（数量）高低的标志， 通常采用生物学方法测定。噬菌体效价： 又称噬菌斑形成单位（pfu）数,指每毫升试样中含有侵染性噬菌体的粒子数。●双层平板法技术要点： 1.双层琼脂 , 2.半固体琼脂 3.高浓度宿主细胞, 4.倒上皿温度●双层平板法测定效价的优点1）弥补平板不平2）噬菌斑位于同个平面，较清晰3）上层为半固体培养基，有利噬菌体 扩散 ●一步生长曲线（Debruck，1939） 定量描述烈性噬菌体生长规律的实验曲线，用于反映各种噬菌体潜伏期、裂解期和裂解量的特征曲线。●实验步骤问题：1）在一个培养系统中，如何测定噬菌体数量？ 2）请设想不断的定时测定，群体数量的变化过程？1、用噬菌体的稀释液感染高浓度的宿主细胞；2、数分钟后，加入抗噬菌体的抗血清（中和未吸附的噬菌体）；3、将上述混合物用培养物大量稀释，终止抗血清的作用和防止新释放的噬菌体感染其它细胞；4、保温培养并定期检测培养物中的噬菌体效价（对噬菌体含量进行计数）；5、以感染时间为横坐标，病毒的感染效价为纵坐标，绘 制出病毒特征性的繁殖曲线； ●潜伏期：(侵入到装配): 隐悔期；胞内累积期●裂解期：●平稳期：效价最高期●裂解量：每个受染细胞产生的噬菌体的总数。（平稳期pfu/ 受染细胞？）●温和噬菌体溶原性（溶原现象）:温和噬菌体侵入宿主后并不引起宿主细胞裂解的现象称之。溶原菌：受温和噬菌体感染的宿主称之为溶原菌。前噬菌体：整合在宿主基因组上的温和噬菌体的核酸。●溶源原因----合成阻遏蛋白，阻遏噬菌