微生物分离与纯培养.pptxVIP

第1页/共39页本章内容：一、无菌技术(重点)二、用固体培养基分离纯培养（重点）三、用液体培养基分离纯培养（掌握）四、单细胞分离五、选择培养分离第2页/共39页小！微生物的基本特点： 在绝大多数情况下都是利用微生物的群体来研究其属性微生物的物种（菌株）一般也是以群体的形式进行繁衍、保存培养技术在微生物学中具有重要意义！第3页/共39页第4页/共39页培养物：在一定条件下培养、繁殖得到的微生物群体混合培养物：含有多种微生物的培养物纯培养物：只有一种微生物的培养物通常情况下只有纯培养物才能提供可以重复的结果纯培养技术是进行微生物学研究的基础！第5页/共39页一、无菌技术 从混杂的群体中分离特定的某一种微生物，是研究和利用微生物的第一步。 用于分离、培养微生物的器具事先不含任何微生物； 在转接、培养微生物时防止其它微生物的污染；第6页/共39页第7页/共39页1、微生物培养的常用器具及其灭菌常用的器具：试管、瓶子、培养皿等1887年，R J Petri 发明 Petri dish第8页/共39页1、微生物培养的常用器具及其灭菌常用的器具：试管、瓶子、培养皿等高压蒸汽灭菌常用的灭菌方法：高温干热灭菌第9页/共39页2、接种操作无菌操作：火焰附近（酒精灯、煤气灯）进行第10页/共39页2、接种操作无菌操作：在无菌箱或操作室内无菌的环境下进行第11页/共39页二、用固体培养基分离纯培养液体培养基固体培养基半固体培养基培养基第12页/共39页二、用固体培养基分离纯培养液体培养基固体培养基半固体培养基培养基琼脂柯赫（Robert Koch）的助手W Heese和他的夫人Fran Heese第13页/共39页二、用固体培养基分离纯培养培养基类型凝固剂含量（以琼脂计）主要用途 固体培养基1.5%-2.0%微生物分离、鉴定、计数半固体培养基0.5%-0.8%观察微生物运动特征、鉴定菌种液体培养基无大规模工业生产及在实验室进行微生物的基础理论和应用方面的研究第14页/共39页二、用固体培养基分离纯培养菌落（colony）：单个（或聚集在一起的一团）微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、 有一定形态结构的子细胞生长群体众多菌落连成一片菌苔（lawn）第15页/共39页第16页/共39页不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征（形状、颜色等），可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。第17页/共39页同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落第18页/共39页“谁不知道熵概念就不能被认为是科学上的文化人，将来谁不知道分形概念，也不能称为有知识。”——物理学家 惠勒/v_show/id_XOTAzNjkwNzI=.html/v_show/id_XOTAzNjkwNzI=.html第19页/共39页二、用固体培养基分离纯培养 使微生物在固体培养基平板上形成单个菌落的基本方法：稀释！第20页/共39页1、涂布平板法（spread plate method)使用较多的常规方法，但有时涂布不均匀！第21页/共39页2、稀释倒平板法（pour plate method)操作较麻烦，对好氧菌、热敏感菌效果不好！第22页/共39页3、平板划线法（streak plate method）第一区划线分区划线法（蛇形线法）操作图灭菌接种环第二区划线灭菌接种环第三区划线灭菌接种环分区划线法适用范围：适用于浓度较大的样品第23页/共39页二、用固体培养基分离纯培养第24页/共39页连续划线法操作图连续划线法适用范围：适用于浓度较小的样品第25页/共39页注意：在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到 第26页/共39页二、用固体培养基分离纯培养4、厌氧微生物的分离厌氧手套箱厌氧罐第27页/共39页二、用固体培养基分离纯培养4、厌氧微生物的分离厌氧罐厌氧手套箱第28页/共39页二、用固体培养基分离纯培养4、厌氧微生物的分离将一系列盛无菌琼脂培养基的试管加热使琼脂熔化后冷却并保持在50℃左右；然后将待分离的材料用这些试管进行梯度稀释，试管迅速摇动均匀；冷凝后，在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物，将培养基和空气隔开。稀释摇管法第29页/共39页三、用液体培养基分离纯培养并非所有的微生物都能在固体培养基上生长。例如，一些细胞大的细菌、许多原生动物和藻类等，这些微生物仍需要用液体培养基分离来获得纯培养。第30页/共39页三、用液体培养基分离纯培养 稀释法进行液体分离必须在同一个稀释度的许多平行试管中，大多数（一般应超过95%）表现为不生长例如：若同一稀释度的试管中有95