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Sample Assay Technologies miScript PCR System- PCR有效性的测定 2011-11-18 Amy Sample Assay Technologies miScript PCR System 附录B：PCR有效性的测定以及用于Single-Assay实验的miRNA定量 循环数：  使用miScript or QuantiTect Primer Assays结合 miScript/QuantiTect SYBR Green PCR Kits时，无 论使用的是何种Real-Time PCR仪器，使用的模板 起始拷贝数有多少，PCR进行40个循环就足够了。 相对定量：  基因表达水平可以通过标准化反应中RNA的量而得 到，然而，这需要依赖精确测定RNA的浓度。相对 定量是另外一种测定目的RNA的量与所有样本中都 会表达的内参分子的量的比值的方法。通过这种方 法，标准化的值可以用于对比如不同组织中目标 RNA的不同表达水平。内参分子的表达水平，如管 家基因，在不同的实验条件下/ 同一组织的不同状态 （如：病理状态：正常状态）不能变化。 PCR有效性的测定 Amy 2 Sample Assay Technologies miScript PCR System 相对定量：  因此内参基因的表达水平可以作为定量的参照。目 标核酸和内参分子的扩增效率决定了定量过程的差 异。 测定PCR的效率：  miScript Primer Assays, miScript Precursor Assays, 和QuantiTect Primer Assays经测定都有 很高的扩增效率。然而，因为扩增效率会受到很多 因素的影响（如：仪器、加样、样品中抑制剂的存 在、RT反应的效率），我们建议通过标准曲线来 定量目标RNA和内参分子以确定二者基因的表达 水平。 PCR有效性的测定 Amy 3 Sample Assay Technologies miScript PCR System  miScript PCR Controls是对于一些snoRNAs和 snRNAs 的miScript Primer Assays，这些controls 是用于标准化已知样本中目标miRNA的表达水平， 以及用于对miRNA进行相对定量的理想内参对照 RNA。