LY/T 1772-2008杨树品种分子鉴定实验方法　DNA扩增片段长度多态性法(AFLP).pdf

犐犆犛６５．０２０ 犅６１ 中华人民共和国林业行业标准 ／ — 犔犢犜１７７２ ２００８ 杨树品种分子鉴定实验方法 扩增片段长度多态性法（ ） 犇犖犃 犃犉犔犘 ㅤㅤㅤㅤ — 犕狅犾犲犮狌犾犪狉犻犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀犿犲狋犺狅犱犳狅狉狏犪狉犻犲狋犻犲狊狅犳 狅犾犪狉 狆狆 （ ） 犃犿 犾犻犳犻犲犱犳狉犪犿犲狀狋犾犲狀狋犺 狅犾犿狅狉犺犻狊犿 犃犉犔犘 狆 犵 犵 狆 狔 狆 ２００８０９０３发布 ２００８１２０１实施 国 家 林 业 局 发 布 ／ — 犔犢犜１７７２ ２００８ 杨树品种分子鉴定实验方法 扩增片段长度多态性法（ ） 犇犖犃 犃犉犔犘 １ 范围 　 本标准规定了以杨树新鲜组织（叶片、芽等）为材料，利用扩增片段长度多态性 法（ ＤＮＡ Ａｍ ｌｉｆｉｅｄ ｐ ＦｒａｍｅｎｔＬｅｎｔｈＰｏｌｍｏｒｈｉｓｍ，简称 ＡＦＬＰ）对杨树品种进行分子鉴定的实验方法。 ｇ ｇ ｙ ｐ 本标准适用于杨树品种的分子鉴定。 ２ 原理 　 杨树基因组 ＤＮＡ经限制性内切酶双酶切后，形成分子量大小不等的随机片段，将针对 犈犮狅ＲＩ和 犕狊犲Ｉ的特定接头连接在这些ＤＮＡ片段的两端，形成带特异接头的ＤＮＡ片段，随后利用一对与接头和 邻接酶切位点相匹配的引物进行扩增，最终通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳将这些特异性片段分离开来， 通过比较待测品种和对照品种间 ＤＮＡ指纹谱带数据的差异，来判定待测品种与对照品种是否为相同 品种。 ３ 仪器和设备 　 ３．１ 通用实验室仪器设备。 　 ３．２ 梯度 ＰＣＲ扩增仪。 ㅤㅤㅤㅤ 　 ３．３ 琼脂糖胶电泳系统。 　 ３．４ 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统。 　 ３．５ 紫外透射仪。 　 ３．６ 凝胶成像系统或照相系统。 　 ３．７　重蒸馏水仪。 ４ 试剂与溶液 　 除非另有说明，在分析中使用分析纯试剂。配制好的溶液经高压灭菌后使用。实验中所使用的水 均为无菌超纯水。 ４．１ 犇犖犃限制性内切酶