HPLC高效液相色谱法培训解析.ppt

* （5）正相色谱的应用 正相色谱适用于分离极性化合物。如：酚类、胺类、多环化合物、染料、炸药、羟基化合物、氨基酸和药物等。这些样品在正乙烷或其它烷烃溶剂中的溶解度很小，在极性溶剂中的溶解度良好。用正相色谱分离可得到较好的效果。 在使用正相色谱时一个值得注意的问题是在用氨基作固定相分离糖时，一些还原糖容易与固定相的氨基发生化学反应，产生席夫碱（Schiffsbase)。 * 3) 反相色谱 （1） 基本概念 （2）反相色谱分离原理 （3）反相色谱的固定相 （4）反相色谱的流动相 （5）流动相与固定相之间的关系 （6）实验条件对分离的影响 （7）反相色谱的特点 （8）反相色谱的应用 * （1）基本概念 反相色谱——固定相为非极性基团，流动相为极性溶剂。固定相极性小于流动相的一种色谱方法。 由于固定相极性小于流动相，相对关系正好与液-固色谱法相反，因而这种色谱方法被称为反相色谱法。被共价结合在载体上的固定相是一些直链碳氢化合物，如正辛基等。 * （2）反相色谱分离原理 反相色谱法的分离原理主要根据所分离化合物疏水性不同在固定相上所滞留的时间不同而得到分离。 当水中存在非极性溶质时，溶质分子之间的相互作用以及溶质分子与水分子间的相互作用远小于水分子之间的相互作用，因此溶质分子从水中被“挤”了出去，整个系统的熵增加，自由能降低，使得疏水性强的化合物从流动相移出，因而在色谱柱中滞留的时间延长。 * （3）反相色谱的固定相 反相色谱的固定相中最常见的是被共价结合在硅胶载体上的直链饱和烷烃，其链长短也不同，最长的是18烷基，也是使用得最多的固定相。 反相色谱常用的微粒键合相 官能团 载 体 颗粒直径 十八烷基 Zorbax 3~10 mm 辛 烷 基 Nucleosil 100A 3~10 mm 苯 基 m porasil ~7 mm 二甲硅烷 Lichrosorb 3~10 mm * （4）反相色谱的流动相 反相色谱的流动相最常用的是水、甲醇、乙腈、丙酮、异丙醇、四氢呋喃等。 反相色谱流动相中主要组成是水，它的极性和表面张力最高，因此水是一种最弱的流动相，用它洗脱非极性组分时，表现出的滞留时间最长。 甲醇和乙腈，是最常用的调节剂，主要在于甲醇和乙腈的紫外切点相对较低，而且粘度较小，以及易于提纯。 * （5）流动相与固定相之间的关系 注意： 缓冲离子不能产生沉淀。 溶剂的紫外切点必须小于所使用的检测波长。 避免使用卤族离子。 pH 值。 * （6）实验条件对分离的影响 温度：反相色谱流动相当为含有机溶剂的水溶液时，粘度较高，最好在较高柱温下操作，以减少粘度，柱温一般可高达50~600C，最高可达800C。 pH 值：对于可离解的组分，改变流动相 pH 值，可以改变分离的选择性，采用一定 pH 值的缓冲溶液作流动相，可以抑制组分的离解。减少峰的拖尾。 * （7）反相色谱的特点 适于分离带有不同疏水基团的化合物。 可通过改变溶剂组成和pH，来分离不同极性的化合物。 可分离从极性到非极性的宽范围的化合物。 * （8）反相色谱的应用 可分离极性到非极性的各种化合物。 氨基酸、多肽和蛋白质的分离。 碱基、核苷和核苷酸的分离。 甾体化合物的分离。 其它：儿茶酚胺、组胺、糖类、维生素、酶等。 * 4) 离子对色谱 （1）基本概念 （2）分离原理 （3）离子对色谱的分类 （4）离子对色谱的应用 * （1）基本概念 离子对色谱以键合相作为固定相，以含有配对离子的溶剂为流动相的色谱方法。 * （1）基本概念 一些样品在水溶液中可以离解为带电荷的离子。 如果在水溶液中加入另一种带有与分离组分电荷相反的离子，使其成为中性的离子对，可使分离顺利进行。 * （2）分离原理 （1）离子对形成原理： 组分离子 配对离子 离子对 A-水相 + B+水相 A-B+有机相 由于离子对具有疏水性，因而被非极性固定相（即有机相）提取，组分离子的性质不同，它与配对离子形成离子对的能力大小不同，及离子对的疏水性不同，导致各组分在固有定相中滞留时间不同，因而得以分离。 * （2）分离原理 （1）通过离子键相结合，改变化合物的疏水特性，影响其分配系数，影响其保留行为。 （2）通过配对离子的疏水作用可逆地