实验酵母菌形态学观察与显微镜直接计数技术1.ppt

“ ” 实验四 酵母菌形态观察、测微技术、细胞计数、不同接种技术、抑菌能力观察 目的要求 内容 原理 方法 结果与分析 一、目的要求 1.观察酵母菌的不同细胞形态（单细胞和假丝） 2.观察酵母菌的繁殖方式(出芽\子囊），学习区别死活细胞的染色方法 3.学习测微技术 4.学习直接计数的方法。 5.学习插片法培养放线菌和点植法培养霉菌。 6.观察土壤芽孢杆菌抗霉菌、抗葡萄球菌能力。 二、实验内容 I. 酵母形态观察 1.肉眼观察酵母菌苔，了解酵母菌培养特性 2.显微镜下观察酵母个体，认识酵母细胞形态：酵母单细胞、牙殖子、子囊孢子染色和假菌丝。 II. 测微技术和计数 1. 用目镜测微尺和物镜测微尺，标定，测定酵母细胞大小。 2.用血球计数板用酵母菌悬液进行计数，学习直接计数法。 III. 实验准备 1.高氏1号培养基融化倾倒，用活化的放线菌，学习放线菌的插片接种法，每2组一板。 2. 马丁培养基倾倒，1组1板，用活化的一种霉菌点植接种青霉菌，曲霉和根霉。 3.观察土壤芽孢杆菌抑菌能力。 三、实验原理 1. 如何区别酵母菌细胞的死活？其原理如何？ 2.酵母菌的生殖方式有哪些？ 3.酵母菌的形态有何特点？ 4.测微技术原理 5.血球计数板的构造及用其进行微生物直接计数的原理？ 三、实验原理 1.用什么方法区别酵母菌死活细胞？其原理如何？ 常用区别酵母细胞死与活的方法，是采用0.1％的吕氏美兰液染色法。 活的酵母细胞由于不停地进行新陈代谢，细胞内氧化还原值颇小，还原力强，美兰染液进入细胞后，能立即还原脱色，不能被美兰液染上颜色； 而死后或接近死亡的酵母细胞，不具有此还原能力，当加入美兰液后，就被美兰液染成兰色。进而达到鉴别的目的。 必须指出，上述鉴别法中酵母细胞的颜色往往会受到美兰液的浓度、作用时间的影响，实际应用操作中应十分注意。 BW 2.酵母菌的生殖方式有哪些？ 1.无性生殖芽殖酵母的种类多，主要是通过出芽的方式进行无性生殖.裂殖酵母菌通过与细菌相似的裂殖方式进行无性生殖，进行裂殖的酵母菌种类很少 。 2.有性生殖 酵母菌的有性生殖方式,是指邻近两个”性别”不同的细胞,相互接触,局部融合,再通过质配,核配和减数分裂,形成4个单倍体子核,每一个子核与其附近的原生质一起,在其表面形成一层孢子壁后,就形成了一个子囊孢子,而原有营养细胞就成了子囊 BW 3.酵母菌的形态有何特点？ 大多数酵母菌为单细胞，形状因种而异。基本形态为球形、卵圆形、圆柱形或香肠形。有些 酵母菌(热带假丝酵母，Candida tropicalis)进行一连串的芽殖后，长大的子细胞与母细胞并不立即分离，其间仅以狭小的接触面相连，这种藕节状的细胞串称为“假菌丝” (图)。（如果细胞相连，且其间的横截面积与细胞直径一致，这种竹节状的细胞串称真菌丝。如霉菌菌丝等）。 BW 子囊孢子染色 孢子壁厚不易着色，但是一旦着色就很难被脱色。因此先用强染色剂（孔雀绿）下染色，使染料进入菌体和孢子，水洗时菌体中染色被洗脱而孢子中染料保留。在用对比度大的复染色剂染色后，菌体染上复染色剂的颜色而孢子保留原来颜色，这样可将两者区别开来。 制片，取在28℃培养7d斜面培养物涂片，并干燥固定 孔雀绿染2min,水洗，95%乙醇脱色，番红染1min,水洗干燥， 4、测微技术 测微尺分目镜测微尺和物镜测微尺。 目镜测微尺是一块圆形玻片，刻度随着使用的目镜和物镜的放大倍数而改变,用前必须用物镜测微尺来标定。 物镜测微尺为一块特制的载玻片，其中央有一小圆圈。圆圈内刻有分度，将长1mm的直线等分为100小格，每小格等于10μm。 物镜测微尺 目镜测微尺 测微技术-标定 先用低倍镜观察，对准焦距，待看清物镜测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与物镜测微尺的刻度相平行，并使两尺的左边第一条线相重合，再向右寻找两尺的另外一条重合线。 目镜测微尺每格长度=两个重叠刻度间物镜测微尺格数×10/两个重叠刻度间目镜测微尺格数。 5、显微镜计数技术 活菌计数法：平板菌落计数法。通过培养活菌，形成菌落而计数。 总菌计数：显微计数法。适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。 显微镜计数技术 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横