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Agilent 1100 HPLC 系统组成及基本操作 赵晓莉 2003.10 汇 报 提 纲 第一部分 液相色谱的基本原理及主要参数 第二部分 Agilent 1100 的仪器组成及工作原理（硬件部分） 第三部分 Agilent 1100 化学工作站及其操作系统（软件部分） 高效液相色谱的基本原理及流程 基本原理：高效液相色谱的分离机制与经典色谱法一致，是基于混合物组分在固定相和流动相之间的不均匀分配，即各个单一组分对两相不同的亲和力和向两相不均匀的扩散。物质的化学性质和结构上的差异，反映在与固定相和流动相之间作用力上的差异，这就是色谱分离的基础。 分离流程：高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱中，经进样器注入样品液，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，所产生的信号经放大后输入计算机，在显示屏上描绘出各组分的色谱峰，其中每一色谱峰代表一个组分。 高效液相色谱系统组成 溶剂传输系统：不断地向系统提供连续、稳定、精确的流量。 样品引入系统：将样品引入整个色谱分离系统，要求引入样品时不改变系统的流量和压力。 样品分离系统：在此样品实现分离，是整个系统的关键部分。 信号检测系统：对分离后的各个系统进行检测，给出响应信号。 数据处理系统：对信号进行处理，给出色谱图，并得到相应的定量结果。 液 相 色 谱 的 类 型 液相色谱中的几个基本参数 1.保留值 1.1 死时间：完全不保留组分流出系统的时间，以t0表示。 1.2 保留时间：从进样开始到峰极大值所需时间，以tR表示。 当色谱操作条件一致时，不同物质有其一定的保留值，可作为定性的基本依据。 2. 峰面积/峰高：Area/Height 定量参数 容量因子 k’ 3. 容量因子 k’：是样品组分的质量在两相中分配的比值。经公式推导得到即为调整保留时间与死时间的比值，可从色谱图上测得。只与固定相、流动相性质及柱温有关，而与流速和柱尺寸无关。 分 离 因 子 ? 4. 分离因子 ?：代表了两个物质在相同的色谱条件下的分离选择性。 ?的改变可以选择不同的固定相或流动相来实现。 柱 效 及 理 论 塔 板 数 5. 理论塔板数 N：是反映物质在固定相和流动相中动力学特性的色谱参数，它代表色谱柱分离效能的指标。 影 响 分 离 度 的 因 素 6. 分 离 度 R：相邻两峰的分开程度 实现有效分离的关键：一是色谱峰要窄，即W h/2值要小；二是两峰间的距离Δt R要大。 要求： R1.5 相邻两峰的分开程度为99.7% 影响分离度的因素： 增加理论塔板数N、容量因子k、 选择性因子?均可提高分离度。 Agilent 1100 系列的仪器组成工作原理 溶剂柜 脱气机 泵 自动进样器 柱温箱 检测器 在线真空脱气机 工作原理：使用半透膜管路，允许气体分子通过，液体分子无法通过。 性 能：提高泵在低流速下的操作性能，有效降低基线噪音并可保证保留时间具有更好的重现性。 Ajilent 1100 系列四元泵 工作原理： 性 能： 流量范围0.2~10ml/min； 四通路可灵活进行等度或梯度洗脱； 自动冲程调节，混合均匀，降低基线噪音。 泵 头 结 构 图 Agilent 1100 系列自动进样器 技术指标： 样品容量： 100 x 2 ml vials in 1 tray 进 样 量: Standard: 0.1~100 μl Up to 1.8 ml using multi draw option Expanded injection range : 0.1~900 μl 精 度: 1~5 μl 1% RSD 5~100 μl 0.5% RSD 残 留: Without needle wash 1%