实验九微生物生理生化实验.pptxVIP

实验九 细菌鉴定中常用的 生理生化反应 ;一、实验目的;二、实验原理;三、实验材料;四、实验内容;（1）倒平板，凝固后在培养皿底面两侧的中央位置分别标记BS或EC。 （2）用接种环以点接的方式接上菌种。一边接枯草杆菌BS，另一边接大肠杆菌EC。 （3）将接完种的平板倒置于37℃恒温培养箱，培养7ｄ。 （4）观察结果时，可打开皿盖，滴加少量的碘液于平板上，轻轻旋转，使碘液均匀铺满整个平板。如菌苔周围出现无色透明圈，则说明淀粉已被水解，为阳性。 透明圈的大小，说明该菌水解淀粉能力的强弱，即产生胞外酶活力的高低。（以 “+”、“—”表示有无透明圈）;2. 糖类发酵试验（含碳化合物的分解利用）;指示剂：溴甲酚紫（变色范围pH5.2-6.8, pH5.2黄色，pH6.8紫色）;; 色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚 ↑ 吲哚试剂; （1）以液体接种的方式分别接种枯草杆菌和大肠杆菌于蛋白胨水培养基中。 （2）接种后置于37℃恒温培养箱，培养7d。以未接种的作为对照（全班1-2支试管即可）。 （3）观察结果时，在培养液中加入乙醚约1毫升（使呈明显的乙醚层）。充分振荡，使吲哚溶于乙醚中，静置片刻，待乙醚浮于培养液上面时，沿管壁慢慢加入吲哚试剂10滴。如吲哚存在，则乙醚层呈玫瑰红色。 （注意：加入吲哚试剂后，不可再摇动，否则红色不明显）。以“+”、“—”表示有无红色的玫瑰吲哚。;4. VP实验;2CH3COCOOH CH3COCHOHCH3十2CO2 丙酮酸 乙酰甲基甲醇 CH3COCHOHCH3 CH3COCOCH3 乙酰甲基甲醇 NaOH 丁二酮（二乙酰） ;取出塞子， 加10滴VP试剂，振荡混合后，置沸水浴中保温，5分钟后观察实验结果。出现红色这位VP试验阳性。;5 . 石蕊牛乳试验：（利用蛋白质酪素的能力）; （1）以液体接种的方式分别接种枯草杆菌和大肠杆菌于石蕊牛乳培养基中。 （2）接种后置于37℃恒温培养箱，培养7-14d。 （3）观察结果时，看各管颜色变化及牛乳胨化的现象。;五、实验报告;（1）淀粉等生物大分子物质能否不经分解而直接被细菌吸收？为什么？ （2）假如某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发??试验应该出现什么结果？ （3）解释在细菌培养中吲哚试验的化学原理，为什么在这个试验中用吲哚的存在作为色氨酸酶活性的指示剂，而不用丙酮酸？ ;