动物垫料中大肠埃希氏菌O157：H7检测-内蒙古.docVIP

ICS? FORMTEXT 07.100.99 FORMTEXT B 41 FORMTEXT ????? DB FORMTEXT 15 FORMTEXT 内蒙古自治区地方标准 DB FORMTEXT 15/ FORMTEXT XXXXX— FORMTEXT XXXX FORMTEXT ????? FORMTEXT 动物垫料中大肠埃希氏菌O157：H7/NM检测方法 FORMTEXT Method for Detecting Escherichia coli O157: H7/NM in animal bedding FORMTEXT 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 FORMDROPDOWN FORMTEXT ????? FORMTEXT XXXX - FORMTEXT XX - FORMTEXT XX发布 FORMTEXT XXXX - FORMTEXT XX - FORMTEXT XX实施 FORMTEXT 内蒙古自治区市场监督管理局???发布 DBXX/ XXXXX—XXXX PAGE 11 前??言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国呼和浩特海关提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国呼和浩特海关、二连浩特市疾病预防控制中心、内蒙古自治区农牧业科学院。 本标准主要起草人：赵治国、崔强、郭文丽、延涵、王海艳、陈林军、敖威华、韩祎陟、罗晓平、李军燕。 动物垫料中大肠埃希氏菌O157：H7/NM检测 范围 本标准规定了动物垫料中大肠埃希氏菌O157：H7/NM的定性检测方法、设备和材料、培养基和试剂。 本标准适用于动物垫料中大肠埃希氏菌O157：H7/NM定性检测。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 GB/T 33682 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴别微生物方法通则 SN/T 1538.1 培养基制备指南 第1部分：实验室培养基制备质量保证通则 SN/T 1538.2 培养基制备指南 第2部分：培养基性能测试实用指南 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 动物垫料 animal bedding 用于吸收动物排泄物，使动物保持舒适生活环境的铺垫物。包括动物笼内非直接与动物机体接触的铺垫物。 4 设备和材料 4.1 冰箱：2 ℃～5 ℃。 4.2 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃。 4.3 均质器。 4.4 振荡器。 4.5 电子天平：感量0.1 g，0.0001 g。 4.6 全自动微生物生化鉴定系统。 4.7 飞行时间质谱仪。 4.8 酶联免疫分析仪。 4.9 二级生物安全柜。 4.10 pH 计。 4.11 微量移液器。 4.12 无菌锥形瓶：容量500 mL，250 mL。 4.13 无菌吸管：1 mL(具0.01 mL刻度)、10 mL(具0.1 mL刻度)或微量移液器及吸头。 4.14 无菌培养皿：15 mm×90 mm。 4.15 无菌棉签。 4.16 无菌镊子。 4.17 无菌剪刀。 4.18 无菌勺。 4.19 无菌玻片。 4.20 无菌接种环。 5 培养基和试剂 5.1 实验用水符合GB/T 6682的要求。 5.2 改良EC肉汤(mEC+n)：见附录A.2。 5.3 改良山梨醇麦康凯琼脂(CT-SMAC)：见附录A.3。 5.4 三糖铁琼脂(TSI)：见附录A.4。 5.5 营养琼脂：见附录A.5。 5.6 半固体琼脂：见附录A.6。 5.7 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-MUG(MUG-LST)：见附录A.7。 5.8 氧化酶：见附录A.8。 5.9 革兰氏染液：见附录A.9。 5.10 大肠埃希氏菌O157显色培养基。 5.11 大肠埃希氏菌O157和H7诊断血清。 5.12 生化鉴定试剂盒。 5.13 革兰氏阴性菌生化鉴定卡。 5.14 飞行质谱仪靶板。 5.15 大肠埃希氏菌O157:H7/NM ATCC 35150或等效标准菌株。 5.16 EHEC肠道出血性大肠埃希氏菌 ATCC 35130或等效菌株。 5.17 大肠埃希氏菌株 ATCC 25922或等效标准菌株。 6 检验程序 大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验流程序见图1。 样品制备 样品制备 检样 检样25g或25cm2样液+225mL mEC+肉汤