选修121微生物的实验室培养.pptxVIP

巴斯德法国，微生物学家失败的原因：发酵物中混入了杂菌到目前为止， 几十项诺贝尔生理或医学奖，化学奖 都与微生物学有关病毒无细胞结构：原核生物:细菌、蓝藻原核细胞微生物的类群有细胞结构单细胞的动植物原生生物：真核细胞如草履虫、单细胞藻类等真菌:如酵母菌专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养1.提供营养和条件2.防止污染微生物生存的环境和营养物质一.培养基：思考：微生物“吃”什么？碳源、氮源、水、无机盐1.基本成分：自养微生物CO2、CO32-、HCO3-无机碳源：⑴碳源有机碳源：牛肉膏、蛋白胨等异养微生物NH4＋、NO3-无机氮源：⑵氮源有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的： 碳源、氮源、能源。微生物生存的环境和营养物质一.培养基：2.特殊营养：维生素（如乳酸杆菌）、碱基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH、氧气的需求：霉菌（pH调至酸性）细菌（pH调至中性或微碱性）厌氧生物需提供无氧条件。微生物生存的环境和营养物质一.培养基：4.培养基种类物理性质：有无 凝固剂琼脂液体培养基固体培养基分离 鉴定工业 生产化学成分：天然培养基 合成培养基培养基的种类划分标准培养基种类特点用途物理性质化学成分天然培养基合成培养基用途鉴别培养基液体培养基不加凝固剂工业生产观察微生物的运动、分类鉴定半固体体培养基加凝固剂，如琼脂微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种固体体培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产培养基成分明确分类、鉴定在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物选择培养基在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类微生物液体培养基：表面生长均匀混浊生长沉淀生长半固体培养基：固体培养基：菌落无动力有动力(弥散)back(是否运动) 几种选择培养基加入青霉素的培养基分离酵母菌、霉菌等真菌不加氮源的无氮培养基分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基分离导入了目的基因的受体细胞back1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方琼脂20.0g牛肉膏5g蛋白胨10gNaCl 5gH2O定容至1000ml牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。生产科研5. 配制原则⑴目的明确：根据微生物的种类、培养目的选择原料自养型：不加碳源（CO2碳源）异养型：有机碳源⑵营养全面、浓度适宜、比例恰当加入缓冲剂⑶适宜的pH值：细菌偏碱，真菌偏酸消毒灭菌定义方法防止外来杂菌的污染二.无菌技术：1.消毒与灭菌：强烈的理化方法，较为温和理化方法，杀死所有微生物杀死部分有害菌体（包括芽孢、孢子）（不包括芽孢、孢子）煮沸消毒法灼烧灭菌干热灭菌接种环、接种针等 金属用具100℃、5~6min巴氏消毒法70~75℃、30min80℃、15min高压蒸汽灭菌耐高温需保持干燥的 物品，160～170℃ 1～2小时化学药剂培养基，100KPa、121℃、15～30min酒精、氯气、石炭酸等紫外线思考请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1） 培养细菌用的培养基与培养皿（2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管（3） 实验操作者的双手防止外来杂菌的污染二.无菌技术：1.消毒与灭菌：超净工作台实验操作空间消毒2.无菌范围：操作者的手、衣着消毒实验用具灭菌实验操作过程酒精灯旁操作三.菌落固体培养基上单个或少数菌体1.定义：子细胞群体大量繁殖2.特征：大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。3.功能：鉴定菌种的重要依据1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方琼脂20.0g牛肉膏5g蛋白胨10gNaCl 5gH2O定容至1000ml四.大肠杆菌的纯化培养：分散成单个细胞,形成单个菌落㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：培养基用量依配方计算各成分的用量2.称量：牛肉膏黏稠，用称量纸称取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖3.溶化：牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl→琼脂→补水定容4.调pH、分装、封口：5.灭菌：培养基、培养皿6.倒平板：约50℃倒平板灼烧灭菌，防止瓶口的微生