细胞生物学研究方法4学时.pptxVIP

细胞形态结构的观察方法 Methods for observing cell morphology and structures 细胞组分的分析方法 Methods for analyzing cell constituents 细胞培养、细胞工程 Cell culture and cell engineering 细胞及生物大分子的动态变化 Dynamic analysis of biological macromolecules in cells 用于细胞生物学研究的模式生物 Model organisms in cell biology ;第一节 细胞形态结构的观察方法;;光学显微镜的分辨率resolution of optical microscope;普通光镜的最大分辨率是0.2μm。;一、普通复式光学显微镜技术;2、相差显微镜 phase contrast microscope;F. Zernike于1935年发明并因此获1953年诺贝尔物理奖;倒置相差显微镜 inverted phase contrast microscope;3、微分干涉显微镜 differential interference contrast (DIC) microscope;4、荧光显微镜 fluorescence microscope;集多种功能于一体的——万能研究显微镜;5、激光共聚焦扫描显微镜 laser confocal scanning microscope;Epi-fluorescene;荧光观察细胞结构 细胞内的动态变化 FRET FRP;鲁斯卡(1906～1988)，德国物理学家，1932年研制第一台电子显微镜，1986年获诺贝尔物理奖。; ;1、透射电子显微镜 transmission electron microscope, TEM;超薄切片制样技术;负染色技术 Negative staining;亦称冰冻断裂，主要用来观察膜断裂面的蛋白质颗粒和膜表面结构。;2、扫描电子显微镜 scanning electron microscope, SEM;Figure 3-23. Scanning electron microscopy. Scanning electron micrograph of the stereocilia projecting from a hair cell in the inner ear of a bullfrog (A). For comparison, the same structure is shown by differential-interference-contrast light microscopy (B) and by thin-section electron microscopy (C).;三、扫描隧道显微镜 scanning tunneling microscope, STM;X-ray crystallography X射线衍射;第二节 细胞组分的分析方法;在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，用于分离不同大小的细胞和细胞器 。;2、密度梯度离心  density gradient centrifugation ;其它生化分离方法;Figure 3-42. SDS polyacrylamide-gel electrophoresis (SDS).;二、细胞内核酸、蛋白质、糖等成分的显示方法;Myofibrillar ATPase: Identifying Fast and Slow Fibers;是根据免疫学原理，利用抗体同特定抗原专一结合，对抗原进行定位测定的技术，常用的标记物有荧光素和酶 免疫荧光法（immunofluorescent technique） 酶标免疫法（enzyme-labeled antibody method）;免疫荧光法;利用分子探针检测细胞内特殊DNA序列、和RNA基因表达的方法。;五、定量细胞化学分析技术;第三节 细胞培养、细胞工程与显微操作技术;原代培养 (primary culture)：从动物机体取出进行培养的细胞群。 传代培养 (passage)：将细胞从一个培养瓶转移到另外一个培养瓶即称为传代或传代培养。 细胞株 (cell strain) 和细胞系(cell line);二、植物细胞培养;两个或多个细胞合并成一个双核或多核细胞的过程称为细胞融合 (cell fusion)或细胞杂交 (cell hybridization) 基因型相同的细胞融合称为同核体；来自不同基因型的杂交细胞称为异核体； 诱导方法：生物(病毒)、化学(PEG)、物理(电激、激光)。;单克隆抗体技术 monoclonal