第二章+基因工程.pptxVIP

;参考书: 1. 《基因工程》孙明 高等教育出版社 2. 《基因工程原理》 吴乃虎 科学出版社 3. 《分子克隆实验指南》 J. Sambtook, EF Frish, T Maniatis. 金冬雁等译，科学出版社 4. 英国 Principles of Gene Manipulation 5.《基因操作原理》 中文版 瞿礼嘉、顾红雅 译 高等教育出版社;原理：通过基因重组, 让目的基因在受体细胞中高效稳定表达。 操作水平：DNA分子水平 结果：定向地改造生物的遗传性状，获得所需要的品种。;基因工程(gene engineering) 常和以下名称混用; 血液 供血者 受血者 注射器 目的基因 供体 受体 载体 ; ;基因工程的诞生与发展;基因工程的诞生与发展;基因工程的诞生与发展;基因工程的诞生与发展;1979年，人类生长激素;First transgenic animal, the golden carp, is cloned by Chinese scientists in 1981. Canada‘s first biotechnology company, Allelix, is formed in 1995. Today Biotechnology has made a great impact in agriculture ,medicine ,food and many other products. ;什么是基因?;;;基因工程的优点;基因具有相同的物质基础 基因是可切割的 基因是可转移的 多肽与基因之间有对应关系 遗传密码通用 基因可以复制遗传;（1）获得目的基因；? （2）与克隆载体连接，形成新的重组DNA分子；? （3）用重组DNA分子转化受体细胞，并能在受体细胞中复制和遗传；? （4）对转化子筛选和鉴定；? （5）对获得外源基因的细胞或生物体通过培养，获得所需的遗传性状或表达出所需要的产物。;基因工程操作的工具; 限制性核酸内切酶;;Ⅱ型限制酶的特性 ;;(a)5’－P单链延伸的粘性末端;②平头末端（平端）;;;同裂酶（isoschizomer） 有一些来源不同的限制酶识别的是同样的核苷酸靶序列，这类酶特称为同裂酶。同裂酶的切点位置可相同或不同。;;单酶切法 双酶切法 部分酶切;1、具有互补粘性末端片段的连接 2、具平末端DNA片段之间的连接 3、DNA片段末端修饰后进行连接 4、DNA片段加杆后连接; DNA连接酶;具有互补粘性末端片段的连接;具有互补粘性末端和平末端片段的连接;;;要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去。能将外源基因送入细胞的工具就是运载体;质粒是能自主复制的双链环状DNA分子;;细菌人工染色体克隆载体;其他种类的载体包括：PCR克隆载体、噬菌体克隆载体、细菌克隆载体、病毒克隆载体、穿梭克隆载体、细菌人工染色体、细菌表达载体、真核表达载体、昆虫细胞载体、酵母表达载体、体外表达载体、荧光蛋白载体、双杂交载体、信号转导载体、siRNA表达载体、热休克载体、报告基因载体、亚细胞定位载体、转座子构建载体、噬菌体展示载体;基因操作的基本步骤;将需要的基因从供体生物的细胞内提取出来;细胞内总DNA的提取分离程序;双链DNA加热至90-95℃变性解旋成为单链DNA，成为互补链聚合反应的模版; 2、利用PCR扩增目的基因;PCR之歌 从前你要扩增DNA，总有培养大批细胞的重任要你背。这时有个家伙叫Kary Mullis博士的，他钻出来说体外合成也OK！ 只消把你的模板混上缓冲液，再加些引物——核苷和聚合酶。 变性，退火，和延伸。加热~凉凉~加热~好神奇！！ 当你想要检测突变，来啊，做PCR吧！当你想要基因重组，来啊，做PCR吧！当你想要侦破大案，来啊，做PCR吧！当你想知道孩子他爹到底是哪个混蛋，来啊，做PCR吧！！！; 3、人工基因合成法;;目的基因与运载体结合--形成重组DNA;基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌和动植物细胞等。如用质粒作运载体,则选大肠杆菌为受体细胞 目的基因可以随着受体细胞进行快速的繁殖，在很短的时间内获得大量的基因。;将重组DNA导入受体细胞并扩增;筛选含有目的基因的受体细胞;1、根