最病理解剖技术最终版.ppt

Verhoeff铁苏木素染色法：弹力纤维黑色或黑蓝色，胞核黑色，胶原纤维呈红色 Verhoeff铁苏木素染色法 新版课件 * Lendrum纤维素染色法 显示肾小球毛细血管腔内血栓形成 新版课件 * 第四章： 新版课件 * 免疫组织化学（Immunohistochemistry） 一．定义： 应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位、或定量研究，这种技术称免疫组织化学（immunohistochemistry） 或免疫细胞化学（immunocytochemistry），简称免疫组化。免疫组化技术是1941年 Coons等学者首创的，随着其理论及技术的发展，目前已发生了日新月异的变化。 新版课件 * 1．免疫组化的方法： 1）直接法 2）间接法： SPA、 PAP、 ABC、 LAB法等，间接法 的灵敏度高于直接法。 2．标记的物质：荧光染料、放射性同位素，酶（辣根过氧 化物酶、碱性磷酸酶等）铁蛋白、胶体金等。 3．根据标记物区分：免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和 免疫金银法。其中免疫荧光法和酶标法应用 广泛。 新版课件 * 反差 新版课件 * 二．免疫组化的基本知识 1．原理：抗体与抗原间的结合具有高度的特异性，免疫纽织化学正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫后获得特异性抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的抗原物质。由于抗原与抗体结合后形成的免疫复合物是无色的，因此还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来，以期达到对组化或细胞中的未知抗原进行定性、定位甚至定量的研究。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等，都可以用相应的特异性抗体进行检测。 新版课件 * 2.抗原性的保存：上述谈到的抗原或半抗原物质，防止在组织或细胞内丢失是非常重要的。在组织处理过程中，如固定、包埋、薄切、反应，必须保持其抗原性，特别是选择的固定液及包埋方法要十分注意。 3.抗体：抗体是机体受抗原刺激后，由B淋巴细胞、特别是浆细胞分泌产生的一种与相应抗原发生反应的一种球蛋白，即免疫球蛋白（Immunoglobulin,Ig)，共有五类：IgG, IgA, IgM, IgD, 和IgE，主要分布在血清或外分泌物中，以IgG为主，约占70~80％。 新版课件 * 1〕抗体的制备方法： A 多克隆抗体（血清抗体〕：指机体接受抗原主动免疫或被动免疫后从血清中分离提纯的抗体。 B 单克隆抗体：是1975年由Kohlenh Milstein发明的一种新技术。其原理是将体外培养的骨髓细胞和免疫的脾细胞相融合，产生杂交细胞。这种融合的杂交细胞既有骨髓细胞的无限生长能力，又有浆细胞分泌单一抗体的能力。将该免疫细胞纯化，成为单克隆系，就能产生大量专一的高纯度的抗体，即单克隆抗体（monoclonal antibody,McAb) 新版课件 * 2) 单克隆抗体与多克隆抗体特性的比较 特性 多克隆 单克隆 组成 多种类抗体的混合物 单一种类的抗体 特异性 低针对多个抗原决定族 高针对单一的抗原决定族 亲和力 平均亲和力较高 不定，较低 交叉反应 高 低 新版课件 * 4．抗原与抗体的特异性结合 ? 抗原与抗体的结合具有高度的特异性。在抗体的轻链和重链的可变区中有3个特殊的易变部位，即在第30位、50一60位和第100位氨基酸残基附近，这些部位称为超变区。超变区直接参与抗原接合部位的组成，形成的接合部位是一个浅平穴槽，槽大小约I.5nm×0.6nm×0.6nm抗原决定族在空间呈互补性地嵌入槽内，借分子间的范德华力、疏水作用静电引力以及氢键而相互结合。抗原与抗体分子的结合不受两者数量比例的限制，但如要出现肉眼可见的反应， 则抗原与抗体的量需有一定的适当的比例，否则在抗原与抗体过量的情况下，不能聚合成大颗粒，因此不能出现肉眼可见的反应。 新版课件 * 三．免疫组织化学的基本技术 （一〕? 取材 1．