合集高中生物选修三基因工程.ppt

一、获取目的基因 2、获取方法： （2）用PCR技术扩增目的基因 PCR结果： 使目的基因以 形式在短时间内大量扩增。 指数 新版课件 * 一、获取目的基因 2、获取方法： （3）用化学方法人工合成 如果基因比较小， 又已知，可以通过 用化学方法直接人工合成 核苷酸序列 DNA合成仪 新版课件 * 二、基因表达载体的构建 1、目的： （1）使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以 给下一代； （2）使目的基因能够 和发挥作用 遗传 表达 新版课件 * 二、基因表达载体的构建 2、过程： 载体 目的基因 同一种限制酶 具有黏性末端的载体 具有相同黏性末端的目的基因 重组DNA分子 DNA连接酶 （重组载体） 新版课件 * 二、基因表达载体的构建 3、组成： 启动子+目的基因+终止子+标记基因+(复制原点） 新版课件 * 三、将目的基因导入受体细胞 1、转化的概念 2、转化的方法 植物：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 动物：显微注射技术 微生物：Ca2+处理法 此外还有 3、转化的受体细胞 植物：常用体细胞 动物：受精卵 微生物：常用大肠杆菌、酵母菌等 新版课件 * 四、目的基因的表达和鉴定 1、导入的鉴定：DNA分子杂交技术 2、转录的鉴定：核酸分子杂交技术 3、翻译的鉴定：抗原-抗体杂交技术 4、个体水平的鉴定：抗虫、抗病等的感染、接种实验 分子水平鉴定 新版课件 * 新版课件 * T 磷酸二酯键 A 新版课件 * 大肠杆菌(EcoRI)的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 限制酶所识别的序列有什么特点? 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个、8个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 新版课件 * 黏性末端 黏性末端 黏性末端：被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 新版课件 * 新版课件 新版课件 * 新版课件 新版课件 * 新版课件 新版课件 * 新版课件 新版课件 * 新版课件 新版课件 * 新版课件 新版课件 * 新版课件 新版课件 * 新版课件 新版课件 * 新版课件 新版课件 * 新版课件 新版课件 * 新版课件 新版课件 * 新版课件 新版课件 * §1-1DNA重组技术的基本工具 新版课件 * 一、基因工程的概念 基因工程是指按照 ，进行严格的设计，并通过 和 技术，赋予生物以新的 ，从而创造出更符合人们需要的新的 和 。 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 结果 DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 获取基因—体外重组—导入基因—表达基因 人类需要的新的生物类型和生物产品 人们的意愿 DNA重组 转基因 遗传特性 生物类型 生物产品 新版课件 * 二、DNA重组技术的基本工具 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” DNA连接酶——“分子缝合针” 载体——“分子运输车” 新版课件 * 识别某种双链DNA分子特定的核苷酸序列，并使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 主要是从原核生物中分离纯化而来 1、来源： 2、作用： 3、特点： 4、结果： 片段的末端的形式 黏性末端 平末端 (一）限制性核酸内切酶（限制酶）---“分子手术刀” 特异性----特定序列、特定位点 形成DNA的双链片段 新版课件 * （二） DNA连接酶---“分子缝合针” 1、种类： 2、作用部位： 两类 E·coli DNA连接酶:连接黏性末端 T4 DNA连接酶 ：连接黏性末端和平末端 磷酸二酯键 新版课件 * 2、运载体必须具备的条件： （1）具有一个或多个限制酶切点，以便与目的基因连接； （2） 能够在受体细胞中复制并稳定地保存，以便目的基因的遗传； （3）具有某些标记基因，以便进行重组DNA的筛选。（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等 ）； （4）对受体细胞无害； （5） 大小合适，以便提取和体外操作。 1、运载体的作用： （1）将目的基因转移到受体细胞中去； （2）使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传； （3）使目的基因能够表达和发挥作用。 （三） 运载体---“分子运输车” 新版课件 *