大脑中动脉闭塞小鼠模型.docVIP

大脑中动脉闭塞小鼠模型 卒中是一种常见的神经系统致命疾病。88%的缺血性卒中系因血管闭塞。 因为大多数缺血组中发生在大脑中动脉支配区，所以大脑中动脉为卒中小鼠模型重点。 堵塞大脑中动脉的管腔内单线模型用来模仿持久或短暂的闭塞。这个技术不需要颅骨切除术，切除部分颅骨的外科手术会影响颅内压及体温。 这一技术已广泛应用于模拟持久和短暂局部缺血症状的小鼠。 方案：大脑中动脉闭塞模型 将5.0单缝线剪成20mm一段，将一端加热烧圆，用显微尺测量直径。我们最终选直径0.21—0.22mm的缝线，用于25-30g体重小鼠。 高压蒸汽灭菌法消毒所有手术用品。70%乙醇消毒手术台和器械。 用5%异氟醚麻醉8-12周小鼠。诱导麻醉后，将异氟醚调至1.5%小剂量维持。 将小鼠仰卧位至于加热板上。插入一直肠探针，监测并维持小鼠体温在36.5-37.5℃之间。 颈部术区备皮。用70%酒精清洁术区。 在立体显微镜下颈部正中1cm切口，拉钩暴露手术部位并找到右侧颈总动脉、颈外动脉、颈内动脉，并将其与周围神经及筋膜分离。 进一步分离ECA远端，用双极电凝器凝固ECA和STA，于凝固点切断ECA和STA 在ECA根部松放两根8.0丝线，在颈总动脉分叉处放置一个血管夹。 在ECA残端做一小切口，测量并记录圆头5.0单缝线的长度，插入小口内并向前送入夹子处。缩紧两丝线，确保单缝线刚好能顺利进入。 移除血管分叉处的血管夹，轻轻向前送入单缝线，从ECA到ICA，大概超过CCA分叉处9-10mm，堵住MCA。整个手术大概花用30-45分钟。 缝合颈部切口，将小鼠放置35℃保温箱中苏醒，然后放回笼中。小鼠苏醒大概需要5-10分钟。若需短暂性大脑中动脉闭塞模型，可在0.5-2小时后将小鼠再麻醉然后将缝线退到ECA根部。 诱导MCAO24小时后，5%异氟醚麻醉小鼠，颈髓离断法取出大脑。冠切成四个2mm片，室温下将每片放置2% 2，3，5-氯三苯四唑（TTC）磷酸缓冲液中，以测定缺血面积大小。将脑切片放在10%中性福尔马林缓冲液中，保持4℃，直至显像。 讨论：1、术中及苏醒前保持小鼠体温恒定很重要。体温影响缺血面积，体温降低缺血面积小，体温过高缺血面积增大。 2、在暴露和分离CCA和ECA时，避免损伤周围迷走神经和气管，那样将导致缺血面积增大，死亡率增高。 3、不要将单缝线插入超过分叉处10cm以上。插入过远会穿破大脑前动脉导致脑出血。 当插入9-10mm时会感到一个阻力，这时需要停下来确定进线长度。