地中海贫血诊断和治疗进展PPT课件.ppt

基因治疗 ★ 根治性基因治疗（基因矫正治疗） ● 基因矫正治疗是把正常的目的基因导入体内，并达到适当、有效、持久的表达，以完全取代原来的病态基因 ● β地贫是β珠蛋白基因的单基因缺陷遗传病， 理论上是基因治疗最理想的模型 ●1984年开始基因治疗的研究，进展缓慢，其原因之一是载体问题，二是转导的β珠蛋白基因片段的大小。 * . ★β珠蛋白基因族 ●非常庞大，调控也非常复杂 ●β珠蛋白基因组 ●上游基因调节元件即位点调控区(locus control region,LCR)的DNase敏感（hypersensitive,HS）片段（包括HS2、 HS3、HS4）对转导后的基因表达非 常重要。 * . ★逆转录病毒载体 ●常用癌瘤逆转录病毒（onco-retroviral vector）携带β珠蛋白基因及其调节元件 ●将人珠蛋白基因导入小鼠红白血病(MEL)细胞进行培养,可成功表达β珠蛋白 ●在小鼠动物模型上将β基因通过逆转录病毒载体转染鼠造血干细胞,在受体红细胞中获得表达。将人β珠蛋白基因导入β地中海贫血小鼠体内,其症状可获得部分改善 * . 缺失型α-地贫 ◆全世界缺失型已达31种 ◆其中－α4 .2(左侧缺失)和－α3.7(右侧缺失)缺失型是遍布全世界的类型，其余突变则随地理和人群分布的不同而异。 ◆在我国，除上述二种缺失外，尚有－SEA(缺失20kb)、THAI(缺失31kb)、FIL(缺失30～34kb)和－α2.7等。 * . 非缺失型α-地贫 ◆目前已报道42种 ◆包括启动子突变、剪接点突变、移码突变、无义突变、终止密码子突变、核苷酸信号位点改变等 ◆中国人非缺失型： HbCS终止密码子突变α2 TAA→CAA HbQO α2 CD125 (Lcu →Pro) ◆其他：Hb Duan，Hb westmead, Hb Hekinan, HbH-CD30, HbH-CD31, HbH-CD59 * . 获得性α-地中海贫血 ●继发于恶性血液病/MDS ●机制： ◆acquired deletion of the -globin gene cluster limited to the neoplastic clone ◆more commonly, inactivating somatic mutations of the trans-acting chromatin-associated factor ATRX, which cause dramatic down-regulation of -globin gene expression. * . β-地贫 ◆ 以点突变为主，少数为缺失所致 ◆全世界报告突变类型170，中国28种 ◆中国常见类型：(9省区检测资料) CD41-42 (41.6%)、IVS-Ⅱ-654(21.8%) CD17 (18.0%)、TATA-nt-28(8.0%) CD71/72(+A)(3.9%)、TATA-29(1.2%) CD26(HbE) * . 诊断 ※临床表现 ★β地贫： ◆轻型常无临床症状或轻微贫血。 ◆重型患者在婴儿期出现慢性进行性贫血、轻度黄疸（间歇性）、肝脾肿大；常有发育不良和骨骼改变，出现地中海贫血面容。 ◆中间型多在幼儿期出现贫血，其症状比重型轻。 * . ★α地贫： ◆静止型无临床症状， ◆轻型常无临床症状或轻微贫血。 ◆中间型（HbH）多在幼儿期或以后出现贫血、黄疸、肝脾肿大；感染常使贫血加重甚至出现溶血危象。 ◆重型多出现死胎或胎儿水肿综合征。 * . ※实验室检查 ★血象：贫血为小细胞低色素性，MCV＜80fl，MCH＜28pg，MCHC＜32%。网织红细胞正常或增高。外周血细胞涂片染色示红细胞大小不等，中央浅染色区扩大，出现异型、靶形、碎片红细胞和有核红细胞、点彩红细胞、嗜多染性红细胞、豪-周小体等。 * . ★地贫筛查： ◆地贫5项：①溶血度（脆性），正常值：＞60%；②HbF；③Hb电泳：HbA2,HbH；④红细胞形态（参见上）；⑤ZPP，以排除缺铁性贫血 ◆地贫6项： ：①溶血度（脆性）；② Hb电泳；③HbF；④HbA2；⑤MHb；⑥G6PD活性。 * . ※α-地贫的基因诊断 ★ 缺失型： ◆ Southern印迹杂交—限制性酶谱分析法： 主要用于较大片段缺失 ◆ PCR法： ▲跨越断裂点的PCR扩增法(gap-PCR)： 可诊断、区分α地贫1纯