程序性细胞死亡与细胞衰老PPT课件.ppt

DNA片段化分析 细胞凋亡时主要生物化学特征是其染色质发生浓缩, 染色质DNA在核小体单位之间的连接处断裂, 形成180?200bp整数倍的寡核苷酸片段, 在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱(DNA ladder)。 * . 1: DNA ladder 2: 没有用喜树碱（ CAM）处理的淋巴癌细胞397株系。 3：用喜树碱（CAM）处理的淋巴癌细胞397株系。 4：阳性对照。 喜树碱诱导细胞凋亡的检测 * . 末端脱氧核苷转移酶介导的dUTP 缺口末端标记测定法，能对DNA分子断裂口中的3’-OH进行原位标记。 借助于荧光标记物，可用荧光显微镜进行观察。 * . TUNEL 荧光标记法观察细胞凋亡过程中的DNA 片段化 * . 4. 细胞凋亡的分子机制 诱导凋亡的因子： 物理因子：射线、温度刺激 化学因子：活性氧基团和分子、蛋白质 合成抑制剂 凋亡因子：蛋白酶Caspase、肿瘤坏死因子 * . 凋亡方式： 1、Caspase 依赖性的细胞凋亡 2、不依赖于 Caspase的细胞凋亡 * . （1）Caspase Caspase是天冬氨酸特异性的半光氨酸蛋白水解酶，使靶蛋白活化或失活。 它的活性位点包含半胱氨酸残基，切割靶蛋白天冬氨酸残基后的肽键，因此又称之为Caspases(取英文Cysteine C，aspartic acid的词头，Asp ，proteases的词尾) 。 * . Caspase家族的特点 以酶原的形式存在，需要活化， C端同源区存在半光氨酸激活位点。 Caspase分为两类：起始酶和执行酶 * . （2）Caspase依赖性的细胞凋亡 外源性细胞凋亡 产生有活性的caspase3 切割凋亡家族蛋白Bid 切割执行者caspase3酶原 胞质中游离的caspase8聚集到细胞质膜上，形成死亡诱导信号复合物凋亡诱导复合物（DISC） FASL（FAS的配体）+FAS（死亡受体） +FADD（接头蛋白） 剪切的Bid从胞质到线粒体 线粒体向胞质释放CtyC 内源性细胞凋亡 * . 在细胞凋亡的内源途径中，线粒体处于中心地位。 线粒体释放凋亡因子（包括细胞色素C，Smac/DIABLO蛋白, 凋亡诱导因子AIF，限制性核酸内切酶G等），其中最关键的是释放细胞色素c。 细胞色素c+凋亡因子Apaf-1+ caspase9酶原→凋亡复合体，活化caspase9 活化Caspase3 * . 细胞凋亡的外源和内源信号途径 * . (3) Caspase 非依赖性的细胞凋亡 限制性核酸内切酶G 凋亡诱导因子 * . （4）细胞凋亡的调控 细胞中的Caspase酶原分子像埋藏的定时炸弹，时刻准备被外界信号引发，摧毁细胞。 细胞中存在Caspase 抑制因子（IPA),能够与Caspase结合，阻抑其对底物的切割作用。 * . IPA 家族的抗凋亡作用能被特异的凋亡激活因子如Smac/DIABLO蛋白解除。 * . 在细胞凋亡的内源途径中，B细胞淋巴瘤/白血病-2（B cell lymphoma/leukemia-2 Bcl-2 ）家族 通过调控调控线粒体外膜通透性而影响细胞色素C的释放。 * . Bcl-2家族：对细胞凋亡起调控作用。 分为两组： 抑制细胞凋亡： Bcl-2, Bcl-xL, Bcl-w。 促进细胞凋亡: Bax, Bad，Bid 影响APAF1的功能 影响线粒体的结构与功能 * . P53与细胞凋亡 P53是肿瘤抑制因子和促凋亡因子。其产物主要存在于细胞核内。 在依赖P53蛋白的细胞凋亡中，P53蛋白能特异地抑制Bc1-2的表达，而活化Bax的转录表达。 P53基因是人类肿瘤有关基因中突变频率最高的基因。 * . （二）细胞坏死 细胞坏死是细胞程序性死亡的另一种形式，具有包括炎症反应在内的重要生理功能。当细胞凋亡不能正常发生而细胞必须死亡时，坏死作为凋亡的“替补”方式被细胞采用。 * . .卫生. .管理. .卫生. .管理. .卫生. .管理. .卫生. .管理. .卫生. .管理. .卫生. .管理. .卫生. .管理. .卫生. .管理. .卫生. .管理. .卫生. .管理. .卫生. .管理. .卫生. .管理. .卫生. .管理. .卫生. .管理. .卫生. .管理. .卫生. .管理. .卫生. .管理. 第十一章 （ 十三）