大肠菌群计数.pptxVIP

大肠菌群计数;大肠菌群的定义;分布： 广泛分布于自然环境。 来源于人和温血动物的粪便。 卫生学意义 大肠菌群作为粪便污染的指标菌评价样品中是否受到粪便的污染。 大肠菌群计数的高低，直接反映了样品受粪便污染的程度。 表示对人体健康是否具有潜在的危险性。;大肠菌群是理想的粪便污染的指标菌 是人类和温血动物肠道菌群，在数量上占优势。 随粪便排出体外后，在外界环境影响下，其存活时间应与肠道致病菌大致相似或稍长。 检验方法简便，易于检出与计数。 对消毒剂的抵抗力应不低于肠道致病菌。;主要修改内容;大肠菌群计数;第一法 大肠菌群检验MPN法;原标准 乳糖胆盐发酵管 EMB琼脂 乳糖发酵管;操作步骤的改变; 大肠菌群检验程图(新国标MPN法);样品的处理和稀释;根据对样品污染情况的估计,按上述操作，依次制成系列十倍系列样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。 样品匀液的pH值应在6.5～7.5之间，必要时要进行调节，如有些果汁pH值很低，如果不进行调节，检验结果的误差可能就会比较大。;选择适宜的三个连续稀释度的样品匀液，液体样品可以包括未经稀释的原液，每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量需要超过1mL，则用双料LST肉汤）。 36℃±1℃培养24h±2h，检查倒管内是否有气泡产生或轻摇试管时是否有密集连续的细小气泡从管底逸出，如未产气则继续培养至48h±2h。;记录在24h和48h内产气的LST肉汤管数。未产气者为大肠菌群阴性；对产气者，则进行复发酵试验。 注意：以48h±2h为最终观察结果时限。结果也以此时为最终结果。;用接种环从所有48h±2h内发酵产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤管中，置36℃±1℃温箱内，培养48h±2h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。;月桂基磺酸钠能抑制革兰氏阳性菌的生长，同时比胆盐的选择性和稳定性好。由于胆盐与酸产生沉淀，沉淀有时候会使对产气情况的观察变得有些困难； 乳糖是大肠菌群可利用发酵的糖类。有利于大肠菌群的生长繁殖并有助于鉴别???肠菌群和肠道致病菌； 胰蛋白胨提供基本的营养成分； LST肉汤是国际上通用的培养基，与乳糖胆盐肉汤的作用和意义相同，但具有更多的优越性。;发酵试验判定原则：产气为阳性。 检测步骤减少（不必分离培养），检测时间缩短24h。 注：如接种量超过1mL，则应用双料LST肉汤;胆盐可抑制革兰氏阳性菌。 煌绿是抑菌抗腐剂，可增强对革兰氏阳性菌的抑制作用。 乳糖是大肠菌群可利用发酵的糖类。有利于大肠菌群的生长繁殖并有助于鉴别大肠菌群和肠道致病菌。 发酵试验判定原则：产气为阳性。由于配方里有胆盐，胆盐遇到大肠菌群分解乳糖所产生的酸形成胆酸沉淀，培养基可由原来的绿色变为黄色，同时可看到管底通常有沉淀。;结果报告;MPN检索表的应用;1g(mL)检样中最大可能数（MPN）表;使用MPN检索表的注意点;当实验结果在MPN表中无法查找到MPN值时，如：阳性管数为122，123，232，233等时，建议增加稀释度(可做4~5个稀释度)，使样品的最高稀释度能达到获得阴性终点，然后再遵循相关的规则进行查找，最终确定MPN值。;第二法 平板计数法;适用范围与培养基;平板计数法的检验程序;操作要点;平板菌落数的选择;从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管内，进行证实试验。 BGLB肉汤管产气者，所对应的菌落即为大肠菌群阳性菌落。;结果报告;什么样的菌落必须要做证实试验?;结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA);第三法 大肠菌群PetrifilmTM测试片法;大肠菌群PetrifilmTM测试片法原理;大肠菌群PetrifilmTM测试片检验程序;操作要点;避免人为产生的气泡;结果判读;结果报告;谢谢!