普通组织化学.pptxVIP

组织化学（Ｈistochemistry） 是介于组织学、细胞学与生物化学之间的边缘学科,它是在保持组织或细胞基本上不改变其生活状态时细微结构的条件下采用显微镜对组织或细胞内的某些化学成分和酶活性进行定性、定位和定量研究，以便阐明它们在组织或细胞中存在和含量的机能意义。 ; 组织化学源于组织学、细胞学和生物化学，又有别于这些学科。 组织化学与组织学和细胞学的不同在于，组织学和细胞学的着眼点是研究组织和细胞形态结构； 而组织化学的着眼点是研究组织和细胞内的化学组成及其含量； ; 生物化学技术中通常是将组织和细胞破坏制成均浆，然后进行化学沉淀，故其定位性能差； 而组织化学技术中是尽可能在组织或细胞内原位显示各种化学成分，故定位性能好。 生物化学技术中的化学反应是在试管内进行的，而组织化学技术中的化学反应通常是在组织切片或涂片中进行的。 ; 组织化学在显微镜下能看到所 要检查的化学物质。 所看到的不是某种化学物质本 身，而是该物质在其存在的部 位经过化学反应后看得见反应 产物。 这种产物所在的位置和数量能 够代表该物质的位置和数量。 ; 组织化学的基本原理是在组织切片或细胞内的拟检成分起化学反应。形成有颜色的终末反应产物，该产物沉淀在相应成分所在的位置上，用以研究糖类.脂类.蛋白质.酶类和核酸等物质在组织或细胞内的分布含量。 ; 在组织切片或涂片上显示不同的化学物质，需要采用不同的组织化学处理程序. 就是应用某类方法处理之后所显示出的反应产物，只能代表相应的某类物质而不能代表其他。 ;原理：化学试剂+化学物质--------变成有色反应产物 ; 用显微镜观察其变化者称显微镜细胞组织化学，若用电镜观察者称电镜细胞组织化学，用免疫技术方法则称免疫组织化学或免疫电镜细胞化学。 用细胞和组织化学方法显示细胞组织结构中各种酶的定性、定位、定量则称酶组织化学。 ;TX 第二节 细胞和组织化学的基本技术 在应用 组织化学技术显示组织和细胞内化学物质及定位和定量以及代谢状态时，需要满足以下要求： 1、保持组织和细胞形态结构的良好状态，以便反应产物的定位精确。如果形态结构破坏而失真，则定位困难。 ;（一）?????????????????????2、具备一定的特异性，以便获取正确的实验结果。 （?? 3、具备一定的灵敏性，以便含量极微的物质也能被显示出来。 ;（4 4、生成的反应产物必须是有色沉淀，颗粒微细不溶，定位于原位。反应物沉淀的颜色深度与相应物质含量或酶的活性具有一定的量效关系。 （、 5、反应产物具有稳定性，以便于重复观察 （、 6、要有重复性。 ;???? 7、选择的试剂必须是分析纯，对被检测物质或酶应无任何影响；实验所用器皿必须清洁无污染杂质，使用的蒸馏水应为双蒸水。 8、为了保证实验的可靠性、科学性，防止假阳性的发生，必须同时作对照实验。 ; 一、动物的处死 1、麻醉 对小动物可将浸有乙醚棉球与小动物同时密封于玻璃容器。较大动物静脉注射4%戊巴比妥（1ml/kg体重）或腹腔内注射20%氨基甲酸乙酯（5ml/kg体重）。 2、空气栓塞 较大动物如兔，用较大空针从耳静脉将空气一次推入。 3、颈椎脱臼或断头 适用于小动物 4、股动物放血 将动物麻醉，切开股动脉放血。;二、取材 所取组织细胞必须越新鲜越好，防止组织变性、挤压、破碎，组织块不宜太大，光镜标本不超过1cm×1cm×0.3cm,电镜标本约在0.5mm左右，条件允许时应低温操作（0~4℃）。 冰冻切片材料取材后应立即用液氮速冻， -70℃或-40℃低温冰箱保存。; 三、固定 将组织浸入某些化学试剂，使细胞内的物质尽量接近其生活状态时的形态结构和位置，这一过程称为固定。;1）、固定的意义;2）、固定的要求;不同的固定剂和固定方法会引起不同程度的细胞内蛋白质、粘多糖、脂类、核酸和低分子量物质的损失，因此应根据研究目的的不同选择合适的固定剂和固定方法，以使所研究的物质损失达到最小。 固定液的量要足，一般应为组织块总体积的4~5倍，而且应在组织取下后立即或尽快放入适当固定液中。组织块的大小、固定时间、固定温度都应考虑。 ;3）、固定剂的种类和作用;甲醛;重铬酸钾;苦味酸;丙酮;Bouin液;Carnoy液;Zenker液;  凝固性固定剂:如乙醇.甲