临床色谱质谱检验技—第五章液相色谱-质谱技术（二）.pdf

《临床色谱质谱检验技术》 第五章 液相色谱-质谱技术 临床基因组教研室 佘旭辉 lab-shexuhui@ 2018.04.03 目 录 Contents 一、复习 二、液相色谱-质谱方法的建立 （1 ） 三、小结与思考 《临床色谱质谱检验技术》 复习 Ü液相色谱-质谱联用仪的组成及工作原理 Ü液相色谱-质谱联用中的主要技术问题 液相色谱质谱联用仪的组成及工作原理 液相色谱-质谱联用中的主要技术问题 液相 质谱 流速大 高真空 大量气态溶剂 极少气态溶剂 质量范围无限制 质量范围有限制 可使用不挥发缓冲盐 只能使用可挥发缓冲盐 液相色谱-质谱联用中的主要技术问题 Ü 对 “接口”要求 Ü 接口不破坏质谱真空系统 ，同时不影响色谱柱 的分离柱效 ； Ü 接口使分离的组分尽可能多进入质谱 ，同时让 尽量少的液体流动相进入质谱 ； Ü 接口不改变分离后组分结构 （样品不被分解损 失 ）。 《临床色谱质谱检验技术》 二、液相色谱-质谱方法的建立 （1 ） 液相色谱-质谱联用方法建立步骤 液相色谱质谱方法建立步骤 样品处理 色谱方法 质谱方法 信息及文 方法建立 建立 建立 献检索 样品 样品 分析 数据 采集 制备 测定 处理 生物样品的检测流程 信息及文献检索——需解决的问题 Ü 目标化合物 ： Ü 理化性质 （分子量、化学结构、酸碱性、溶解度等 ） Ü 来源 （内源性、外源性 ） Ü 生物样品中的存在形式 （游离 ？结合态 ？体内代谢形式 ？有无活性 ？同分异构体 ？） Ü 生物样品类型 Ü 血清、血浆、尿液、全血、唾液、粪便、脑脊液等 Ü 临床背景资料 Ü 临床用途及认可度分析 ：诊断、筛查、预后 ？（定性、定量 ？） Ü 预期浓度范围 ？周期性变化 （昼夜节律 ）？ Ü 方法学 Ü 国内外检测方法现状 ，现成检测方法特点 ？辅助设备、试剂耗材等 ？ Ü 其他信息 Ü 样本采集、运输条件 （稳定性 ）？实验室环境要求 ？样品制备前后的稳定性 ？ 信息及文献检索——方法建立前准备 内标物 设备、试剂及环 的选择 境条件准备 目标物