临检血液学-—3贫血检验方法.ppt

2.琼脂糖凝胶电泳 ?地中海贫血(HbH病) 病人资料 姚某，女，13天 碱性血红蛋白电泳: HbH： 57% HbA+F： 42.5% HbA2： 0.5% ?地中海贫血（重型） 病人资料 黄某，男，1岁3个月 碱性血红蛋白电泳: HbA:45.3% HbF:52.7% HbA :2.0 % ?????????? 正常参考值： 成人:HbA 96.5~97.5%,HbA2 :2.5%~3.5%。 注意事项：避免人为血红蛋白污染，Hb浓度最好准确，电泳时间不宜过长，并控制电流不能过大。 3.毛细管电泳 正极 负极 检测器 氘光源 200 nm 约1万伏高压 毛细管 (内径25微米） 进样 - + 温控装置 电泳方向 毛细管电泳工作原理 阳极 阴极 电渗流 负电荷 蛋白在毛细管内的运动 正电荷 无论是带正电、带负电或不带电的粒子， 都在电渗流和电场力的共同作用下，向阴极迁移 带正电的迁移最快 不带电的迁移速度次之 带负电的迁移最慢 电场力 毛细管电泳的特点 液相电泳 无染脱色 全自动化 高分辨率 高清晰度 高敏感度 高效率 高通量 Hb A, F and A2 are detected automatically 毛细管电泳下的血红蛋白检测结果图谱 4.高效液相色谱仪●离子交换层析原理●正常出峰时间依次为HbF、HbA和HbA2●国际地贫协会和美国化学学会推荐使用●β地贫很好临床价值，α地贫有局限性 临床意义： 1）AIHA重要指标：温抗体型IgG为主； 直接试验（+） 间接试验（-） 2）其他：如冷凝集素综合征、药物诱发的免疫性溶血、PNH等直接试验（+） 3）新生儿同种AIHA Rh血型不合者直接、间接（+） ABO血型不合者（-） 二、冷凝集素试验 冷凝集素综合症患者血清中存在冷凝激素（IgM），在低温(0 ～4℃）时使自身红细胞、O型红细胞或受检者同型红细胞发生凝集，当温度上升(37℃）后凝集现象消失。 ????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????缗钱状分布红细胞  成熟红细胞随机呈块状或束状聚集，主要表现1.多种抗体暴露；2.HA（自身免疫性）；3.非典型肺炎；4.金葡菌感染；5.冷凝集疾病。 三、冷热溶血试验 阵发性寒冷性血红蛋白尿征患者体内含有寒冷性溶血抗体(IgG)，在4℃条件下作用于自身红细胞后，即吸收补体造成溶血。将病人的血清置于冰箱中一些时间，再置于室温中，可出现溶血现象。这种先在低温时结合抗原并固定补体，在37℃时才表现溶血的抗体，又叫“双相抗体”（D-L抗体） 过筛试验 第六节、免疫性溶血性贫血的检验 抗人球蛋白试验 冷凝集素试验 冷热溶血试验 溶血一般检验 铁代谢检验 叶酸和维生素B12检验 红细胞膜缺陷的检测 红细胞酶缺陷的检验 免疫性溶血性贫血检验 血红蛋白异常的检验 阵发性睡眠性血红蛋白尿症检验 第七节 血红蛋白异常的检验 抗碱血红蛋白检测 HbF酸洗脱法检测 红细胞包涵体试验 异丙醇沉淀试验 血红蛋白电泳 PCR技术检测血红蛋白基因 一、抗碱血红蛋白检测 HbF抗碱变性的能力比HbA、HbA2强，在Hb液中加入定量的碱液后， HbA、HbA2即发生碱变性，可被半饱和硫酸铵沉淀，HbF因具有抗碱性仍留在溶液中，可用比色法测定其含量。 参考值：成人1 % ～3.1% 新生儿55% ～85% 临床意义： 1.HbF绝对增多： ⑴珠蛋白生成障碍性贫血 重型30～90%；中间型5 ～30%；轻型〈5% ⑵持续性胎儿血红蛋白症HbF高至100%。 2. HbF相对增多：MP、AA、MM、PNH 3.孕妇和新生儿期HbF增加是生理性。 除HbF外，Hb Barts和部分HbH也具有抗碱能力，需通过电泳鉴别 二、红细胞包涵体试验 检测不稳定Hb过筛试验 不稳定Hb与1%煌焦油蓝共同孵育，红细胞内形成变性珠蛋白小体 参考值：正常人1% 温浴1小时出现的包涵体为HbH包涵体 U-Hb（不稳定血红蛋白）阳性， HbF， HbH, HbE增多，G-6PD缺陷可出现阳性 瑞特染色海