临床免疫学—免疫技术总表.docx

名称 概念 分类 标记物 原理 临床应用/技术要点 技术评价 特点 标记方法 发光免疫分析（LIA) 是一种基于检测光学信号，将光信号检测的高敏感性与免疫分析的高特异性融为一体，用于检测微量抗原或抗体的标记免疫分析技术。 时间分辨荧光免疫分析 长寿命荧光 镧系元素 采用镧系螯合物作为示踪物质标记抗原或抗体分子形成荧光标记物，将荧光信号检测的敏感性和抗原抗体反映的特异性融为一体，并利用标记物荧光寿命唱的优势，激发后通过“延迟测定时间”实现对特异性荧光的测定 抗原抗体反应：双抗体夹心法、双抗原夹心法、竞争法 反应条件：抗原-抗体匹配、比例；反应时间、温度、酸碱度等 分析敏感度高 采用96微孔板，适合批量检测 均相：无需洗涤分离，速度快，具较高的分析精密度 荧光偏振免疫分析 偏振荧光 FITC 荧光物质经过单一平面的蓝偏振光照射后，吸收光能跃入激发态，随后回复至基态，并发出单一的偏振荧光。偏振荧光的强弱程度与分子的大小呈正正相关，与其受激发时转动的速度呈负相关 常用于测定半抗原（药物）的浓度 均相：无需洗涤分离、固相吸附，操作简单速度快，具较高的分析精密度 确保天然构象，生物活性不受损 竞争性反应所需标本少，分析速度快 检测小分子半抗原 酶促化学发光免疫分析 需发光底物 ALP HRP 以酶蛋白标记抗原或抗体制备酶结合物，利用酶催化发光底物反应所提供的能量诱导光信号的产生，最终通过测定光化学信号实现对待测物质的免疫分析 抗原抗体反应、双抗体夹心法、双抗原夹心法、固相抗原竞争法 酶标记免疫复合物（B）和游离酶标记物（F）分离、磁颗粒分离法、微粒子捕获法、包被珠分离法 技术优势： 灵敏度高 纳米微球的使用可拓宽分析线性范围 高度自动化 影响因素： 影响小分子半抗原免疫活性 环境影响酶活性、标本中含影响标记酶活性的物质 洗涤不够彻底可因其他来源的过氧化物酶类物质产生非特异性酶发光反应 酶结合物半衰期较短致商品化试剂有效期短 化学发光免疫分析 碱性环境、H2O2 吖啶酯 采用吖啶酯作为示踪物质标记抗原或抗体形成发光标记物，采用纳米微球为故乡载体的分离方式，通过碱性校正液诱导结合标记物发光，并通过测定发光强度实现对超微量物质的定量分析 抗原抗体反应： 双抗体夹心法、双抗原夹心法、间接法、竞争法 酶标记免疫复合物（B）和游离酶标记物（F）分离 纳米磁微球分离法 纳米微球的优点： 1、所携带功能基团可直接与蛋白偶联 2、包被抗体量大大增加，有效检测范围更宽 3、抗原抗体反应更容易达到平衡，节省反应时间 4、高度自动化 发光本底低，反应简单、快速 直接标记，结合稳定，不影响标记物的生物学活性和理化特性，有效期长 固相纳米磁颗粒包被面积大，清洗分离简便、快捷 瞬间发光对检测仪的灵敏度要求高 电化学发光免疫分析 需电子供体-三丙胺 三联吡啶钌 以三联吡啶钌作为示踪物质标记抗原或抗体，并采用纳米微球为故乡载体的分离方式，以三丙胺作为电子供体，通过电场作用诱导结合标记物发光，通过测定发光强度实现对超微量物质的定量分析 抗原抗体反应 双抗体夹心法、双抗原夹心法、间接法、竞争法 酶标记免疫复合物（B）和游离酶标记物（F）分离 磁颗粒分离法 生物素标记抗体的制备 链霉亲和素与纳米磁性微球的偶联 三联吡啶钌衍生物的特殊结构： 标记物性质稳定、抗干扰能力强、有效期较长 氧化还原反应：周而复始，光信号较强、持续时间长，易测定且效率很高 液相中反应:可维持生物分子的天然构象，并可使反应迅速达到平衡，缩短检测时间 生物素-亲和素系统：提高敏感度、通用预包被的受体微球可适用不同检测指标 动态洗涤：高效分离效果 测量室：需定期更换 活性氧途径均相发光免疫分析 标记物与微球偶联而不与抗原或抗体偶联 酞氰、二甲基噻吩衍生物、铕螯合物 均相定量分析 发光物质偶联于供体-受体微球表面 能量传递取决于两者的距离 抗体匹配 受体微球-抗体偶联 生物素标记抗体 优化检测体系 均相：无需洗涤分离、固相吸附，操作简单速度快，适合小分子半抗原 受体微球和供体微球性质稳定：生物活性不受损 三级放大系统：较高分析灵敏度 液相立体的抗原-抗体反应环节 较低背景信号，具较高的分析敏感度 基质效应影响 名称 概念 标记物：胶体金（金盐被还原成金原子后形成的金颗粒悬液） 分类 原理 技术要点/临床应用 特点 制备方法 金标记物的制备（免疫金） 胶体金免疫分析 以胶体金作为示踪标记物或者显色剂，应用于抗原抗体反应的一种新型的免疫标记技术。 1.稳定、均一、呈单一分散状态悬浮于液体中、对电解质的敏感性 2.光吸收性和呈色性：胶体金的光吸收峰波长随颗粒的大小而变化。 3.稳定性：影响因素---电解质、溶胶浓度、温度、稳定剂 还原剂：枸橼酸盐、白磷、硼氢化钠、维生素C 最常用的制备方法：枸橼酸盐还原法 注意事项