（实验三和实验四分离内容） and 4-1.ppt

实验四 细菌的分离培养移植及 在固体培养基中的生长表现实验四(1) 细菌的分离培养 实验三  培养基的制备及常用仪器的使用 掌握一般培养基制备的原则和要求。 熟悉一般培养基制备的过程。 初步熟悉本实验室常用仪器的使用。 一、实验目的 二、实验原理 培养基是按照微生物生长发育的需要，用不同组分的营养物质调制而成的营养基质。 培养基的形态 液体培养基 （半）固体培养基 选择培养基 根据培养基使用目的 鉴别培养基 厌氧培养基 固体培养基 固体培养基是在液体培养基中添加2-3％琼脂制成的。 加热融化的琼脂冷却到45℃可重新凝固。 用琼脂制成的固体培养基在一般微生物的培养温度范围内(25℃-37℃)不会融化而保持固体状态。 灭菌前一定要先加热融化琼脂 三、实验器材： 1.配制各种培养基的试剂/成品。 2.试管(小、中)、烧瓶、小烧杯、平皿、玻棒、天平、电炉、胶塞、量筒（500ml）、移液管等。 3.高压蒸汽灭菌锅。 四、操作步骤 1、计算称量 根据配方，计算 2、溶解 加热溶解时，要不断搅拌。如有琼脂在内，更应注意。待完全溶解后，补足水分到所需要的总体积。 3、调pH 1N NaOH或HCl（精密的pH试纸） 4、过滤 要趁热用四层纱布过滤。 5、 分装 不宜超过试管高度的1/3，装入三角烧瓶中的量以烧瓶总体积的一半为限。 6、加塞 试管口或烧瓶口上应加上一只棉塞/胶塞。 7、灭菌 容器外面再包一层牛皮纸或报纸。 8、无菌检验 37℃温箱培养24h，检查灭菌效果，无菌生长即可使用。 五、实验内容 (一) 普通肉汤的制备(100ml) (二) 普通琼脂的制备 平皿(300ml) 斜面(200ml) (三) 蛋白胨水培养基的制备(100ml) 麦康凯培养基的制备（300ml） (四)葡萄糖蛋白胨水的制备(200ml) 三糖铁培养基的制备(300ml) 注意事项： 称量牛肉膏用小烧杯。 因蛋白胨易潮解，故先称NaCl，然后再称量蛋白胨。 调节好pH后，再加琼脂溶解。 加热前在烧瓶上做好液面高度标记，以便补足蒸发掉的水份。 加热融化琼脂时人不可离开。 分装试管量：1/4-1/3。 倾倒平皿量：12-15ml/皿。 六 常用仪器的使用手提式高压蒸汽灭菌锅 1、加水 取出内层灭菌桶，向外层锅内加入适量的水，使水面与搁架相平为宜。 2、装物 3、加盖 盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内，旋紧螺栓（两两对称的方式使螺栓松紧一致）。 4、加热，排冷空气 (一) 操作步骤 5、计时 锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间，如121℃，20分钟灭菌。 6、切断电源取物 让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。 7、无菌检验 灭菌培养基放入37℃温箱培养24小时，经检查若无细菌生长，即可待用。 （二）压力与温度的关系 10磅(磅/平方英寸），115 ℃ 15磅，121 ℃ 20磅，126 ℃ （三）高压蒸汽灭菌的适用范围 适用于培养基、生理盐水、某些缓冲液、针剂、玻璃器皿、金属器械、工作服等。 糖类溶液或含糖的培养基可用10磅15-20 min灭菌，若压力、温度过高则可使培养基颜色变深。 （四）高压蒸汽灭菌时注意事项 灭菌前要检查灭菌器内水位是否正常 排冷空气 灭菌物品不要互相挤压过紧，以保证蒸汽通畅，使所有物品的温度均匀上升 不耐热的塑料等材料切勿高压灭菌 计时 温箱 冰箱 超净工作台 离心机 小型冷冻干燥机 六 常用仪器的使用 实验报告 1.简述普通肉汤培养基，普通琼脂斜面，葡萄糖蛋白胨水及麦康凯培养基的制备过程。 2.如何正确使用手提式高压蒸气灭菌锅？ 实验分组 培养基 ml 试管（支） 平皿（个） 1 组 肉汤 100 20 （小） 2 组 普琼 200 20 （小） 普琼