兽医免疫学-实验三 HA和HI test.ppt

实验三 血凝和血凝抑制试验 Hemagglutination(HA) and Hemagglutination Inhibition (HI) 以新城疫病毒为例（微量法） 了解病毒HA和HI的原理和操作方法 掌握HA和HI结果的判读方法 一、实验目的 二、实验原理 许多病毒（正粘病毒、副粘病毒等）能凝 集某些动物（鸡、人等）的红细胞，这种 现象称为红细胞凝集现象，简称血凝。 当这些病毒与相应的抗体发生特异性结合 后，失去了与红细胞凝集的能力，称为红 细胞凝集抑制。 HI HA 1. 鸡新城疫病毒抗原(NDV)：弱毒株（Lasota） 2. 鸡红细胞：用生理盐水配成1%悬液 3. 抗凝剂：3.8%柠檬酸三钠缓冲液 4. 被检血清(卵黄抗体) 5. V型血凝板、微量移液器，微量振荡器等 三、实验材料 弃50 四、实验方法 1．做标记； 2．加生理盐水； 3. 第1孔加NDV，然后倍比稀释； 4．加红细胞； 5．立即振荡2min，静置20－30min； 6. 观察结果。 ++++为全部血球发生凝集，呈颗粒状薄膜铺于孔底； +++约有75％血球发生凝集； +约有25％血球发生凝集； ++约有50％血球发生凝集； －不凝集，表现为血球沉于孔底，呈一致密小圆点，与对照孔相同。 （一）血凝试验（HA） 结果判定 以红细胞凝集50％的稀释度作为判定终点； 以50％鸡红细胞凝集（++）的最高病毒稀释倍数作 为该病毒的血凝价。 将血凝价规定为1个血凝单位（U）。 血凝单位的计算方法： 以血凝价为29(512x)为例 8U=8×1/512=64x,即将原病毒稀释64倍； 4U=4×1/512=128x,即将原病毒稀释128倍. 将血凝价规定为1个血凝单位（U）。 （二）血凝抑制试验（HI） 弃50μL 1．做标记； 2.第1孔加8U抗原和被检血清； 3. 从第1孔取样50μL，然后倍比稀释； 4.室温静置10min； 5．加红细胞,立即振荡2min，静置20－30min; 6.观察结果。 结果记录中的-、+、++、+++、++++和HA中的相同 以抑制100％鸡红细胞凝集的血清稀释 度作为判定终点； 以抑制100％鸡红细胞凝集（-）的最 高血清稀释倍数作为该血清的血凝抑 制价。 结果判定 HI HA 对照 作 业 完成实验报告，内容要体现如下6个要素： 目的 原理 实验器材 操作方法 结果判定 结论