临床检验仪器学-—流式细胞仪及其临床应用.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * 一、流式细胞仪的性能指标 灵敏度 是衡量仪器检测微弱信号的重要指标。一般以能检测到单个微球上最少标有FITC或PE荧光分子数目来表示，现在的FCM均可达到检测小于100个荧光分子的指标。 前向角散射光检测灵敏度是指能够检测到的最小颗粒大小，一般目前商品化的FCM可以测量到0.2μ～0.5μ左右。 仪器分辨率 分辨率是衡量仪器测量精度的指标，通常用变异系数值表示： (δ是分布的标准误差，是分布的平均值) 一、流式细胞仪的性能指标 分析速度 以每秒分析的细胞数来表示。当细胞流过的速度超过FCM仪器响应速度时，细胞产生的荧光信号就会丢失，这段时间称为仪器的死时间。 死时间越短，仪器处理数据越快，一般可达到3000～6000个/秒左右。大型机已达到每秒几万个细胞。 分选指标 分选速度指每秒可提取所要细胞的个数。 分选纯度指要分选的目的细胞占分选出细胞的百分比。 分选收获率指被分出的细胞与原来溶液中该细胞的百分比。 二、流式细胞仪的质量控制 光路与流路的校正 确保激光光路与样品流处于正交状态，使仪器检测时的变异减少到最小，从而控制仪器的CV值 流路校正物中所使用的标准荧光微球，其物理性质、生物学化学特性均经过标定 PMT校正 光电倍增管随时间的增加，其放大功率会有所改变，对样品检测的灵敏度会产生影响。为保证样品检测时仪器处于最佳工作状态，采用质控品进行PMT校准，必要时进行电压补偿。 二、流式细胞仪的质量控制 绝对计数校正 为保证仪器在计数时的准确性，仪器应采用绝对计数标准品建立绝对计数标准。该标准品是经标定的，如以计算1000个细胞为1ml，作为设定标准。在样本测定时，以此为标准进行绝对计数，从而获得绝对计数的标准值。 流路校正物中所使用的标准荧光微球，其物理性质、生物学化学特性均经过标定。 四、流式细胞仪的临床应用 流式细胞术临床应用 免疫感染 HIV，TBNK绝对计数 细胞移植的免疫状态监测 干细胞计数 HLA-B27检查 血液 淋巴细胞亚群分析 白血病的免疫分型 网织红细胞计数 阵发性血红蛋白尿(PNH) 血小板功能及相关疾病 肿瘤 肿瘤的细胞周期和倍体分析 肿瘤相关基因表达的研究 CD抗原及其相关细胞群 细胞群 CD抗原 T细胞 CD2 CD3 CD4 CD5 CD7 CD8 CD28 CD38 B细胞 CD10 CD19 CD20- CD24 CD37 CD72- CD75 髓系细胞 CD13 CD14 CD15- CD17 CD33 CD34 CD35 NK细胞 CD16 CD56 CD57 CD94 血小板 CD31 CD41 CD42a CD42b CD61 CD62p CD63 激活抗原 CD26 CD30 CD69 CD95- CD97 粘附分子 CD11a-c CD18 CD29 CD44 CD49a-f 内皮细胞 CD105 CD106 CD109 细胞因子受体 CD25 CD115 CD117 CD122 CD126 FCM临床检测的免疫学基础 先天免疫 获得性免疫 Immune Regulation 免疫细胞功能概述 免疫系统可抵御外部病原体的入侵、清除体内的肿瘤细胞 在器官移植、过敏反应、自身免疫性疾病时过度活化则会损伤机体功能 细胞免疫功能的评价 CD3+：总T细胞数量——免疫大军的数量 CD4+：辅助调节性T细胞——指挥部 CD8+：杀伤性T细胞——战士 CD4/CD8：比例均衡 Th1/Th2：活化/抑制，反馈机制——参谋 Treg：负反馈——权力制约 CD69：早期活化——战斗准备 HLA-DR：持续活化——投入战斗 NK：免疫监视——警察 单核巨噬细胞、DC——情报员 免疫细胞分类——淋巴细胞亚群 Innate Immune Response (no antigen specificity, no memory) Adaptive Immune Response (specificity to antigens after presentation, memory compartment) NK T B T8 CD3-CD56+ CD3+CD8+ T4 Treg TH1 FoxP3+ CD25++CD127+/- TH17 PC I