临床色谱质谱检验技—色谱技术概论第二课时.pdf

《临床色谱质谱检验技术》 第二章 色谱技术概论 临床基因组教研室赵蓓蓓 邮箱：lab-zhaobeibei@ 2018.03.16 目 录 Contents 复习 色谱理论—塔板理论 色谱理论—速率理论 小结及思考 《临床色谱质谱检验技术》 复习 复习 思考 各组分保留时间为何不同？ 色谱峰为何变宽？ 色谱分离过程是否可调控？ 《临床色谱质谱检验技术》 色谱理论 色谱理论 色谱理论需要解决的问题：  色谱分离过程的热力学和动力学问题  影响分离及柱效的因素与提高柱效的途径  柱效与分离度的关系 解答如下问题：  组分保留时间为何不同？  色谱峰为何变宽？ 色谱理论 塔板理论  阐述色谱分离的热力学过程  阐述影响柱分离的效能指标 速率理论  阐述色谱分离的动力学过程  阐述影响柱效的因素与提高柱效的途径 《临床色谱质谱检验技术》 色谱理论—塔板理论 色谱理论—塔板理论 （Plate Theory ） 马丁和辛格首先提出的色谱热力学平衡理论 将色谱分离过程比作蒸馏过程 ，把色谱柱看作分 馏塔 ，将连续的色谱分离过程分割成多次的平衡 过程的重复； 经过多次分配平衡 ，分配系数小的组分 ，先离开 蒸馏塔 ，分配系数大的组分后离开蒸馏塔。  由于蒸馏塔内的塔板数相当多 ，即使组分分配系 数只有微小差异 ，仍可以获得好的分离效果。 塔板理论的基本假设 （1 ）每一塔板内，组分可瞬间在两相中达到分配平衡； （2 ）样品加在第0号塔板上； （3 ）流动相在色谱柱内间歇式流动，每次进入一个塔板体积； （4 ）样品沿色谱柱的纵向扩散（塔板间扩散）可以忽略； （5 ）在所有塔板上分配系数（K ）相等，即K为常数，与组分的量无关。 塔板理论的基本假设  色谱柱长：L  理论塔板间距离：H ，  色谱柱的理论塔板数：n ， 则三者的关系为 ： n = L / H  当色谱柱长度一定时，塔板数 n 越大(塔板高度 H 越小) ，被测组分在柱 内被分配的次数越多，柱效则越高。 塔板理论的基本假设—举例  假设某根色谱柱有5个理论塔板 ，每一个小段内有同样体积的固定液和气体的空间；  某物质在色谱柱内的分配系数是1 （K=1 ）；  在上述假设成立的情况下，100 μmol该物质通过这个色谱柱进行分配的过程。 25μL 25μL 50μL 气相 载气 载气流出 100μL 塔板 0 1 2 3 4 液相 50μL 25μL 25μL 塔板理论的基本假设—举例 如此类推