动物毒理学实验一 小鼠经口急性毒性试验-戴20160428.ppt

急性毒性试验的观察期限为7~14d * 二甲硝咪唑对黑头组织滴虫、牛毛滴虫、结肠小袋虫、鞭毛虫等原虫，及坏死厌氧丝杆菌、梭状芽胞杆菌、厌气葡萄球菌、肠弧菌、密螺旋体菌等细菌，具有显著抑制作用，是治疗火鸡黑头病及猪赤痢的有效药物。 * 科学家在做呕吐反应试验时，鸽子、家犬、猴和猫呕吐反应敏感,适作呕吐实验，家兔、豚鼠等草食动物呕吐反应不敏感,或无呕吐反应,小鼠和大鼠均无呕吐反应,就不宜适用。小鼠和大鼠均无呕吐反应。 * 共济失调是指站立不稳，步态蹒跚，行走时两脚远离分开，摇晃不定，或者是身体向一侧倾斜 惊厥表现为全身或局部性阵发性、持续性四肢肌肉抽搐 * 对于速发性死亡的化学物也可只计算24 h的死亡数，如久效磷24 h与14 d的LD50没有差别. * i与r的关系？ * 注意：LD50的标准误公式中的n与公比公式中的n的不同 * 实验一 小鼠经口急性毒性试验 一、实验目的 1. 学习外源化学物急性毒性试验的设计原则，了解实验基本程序； 2. 掌握小鼠经口灌胃技术； 3. 掌握计算LD50的方法。 二、急性毒性试验原理 动物一次或24 h内多次接触外源化学物后，观察急性毒性反应及其程度，中毒死亡的原因及特征，了解受试动物毒性反应的剂量－反应关系，求出LD50。 三、实验试剂和材料 1. 药物与试剂 盐酸二甲硝咪唑、苦味酸酒精饱和溶液和中性红溶液、记号笔 2. 设备与器械 吸管、烧杯、灌胃器、电子天平（感量0.1 g）、外科手术剪、5 mL注射器、10 mL注射器、干棉球 3. 实验动物 成年健康小鼠，18-22g，雌雄各半 四、实验步骤 1. 剂量选择： 查阅文献，估计预期毒性中值； 预试验，求出受试化学物的0～100%或10～90%大致致死范围，设计正式试验的剂量和分组。 盐酸二甲硝咪唑绝对致死剂量2500mg/kg，最低中毒剂量为800mg/kg 2. 实验动物的标记和分组 染色法，苦味酸酒精饱和溶液和中性红溶液 分组，采用随机法 3. 受试物的配制 （1） 溶剂的选择：选择原则是不与受试物反应，最常用的溶剂为水。助悬剂：淀粉液、明胶液等；助溶剂：吐温80、吐温60、聚乙二醇等。 （2） 配制方法的选择：等浓度稀释法和等容量稀释法。 等浓度稀释法：将受试化学物配制成一种浓度，不同剂量组实验动物单位体重所给受试化学物的体积不同，剂量越高，所用的体积越大；剂量越低，所用的体积越小。 等容量稀释法 将受试化学物配制成不同浓度，不同剂量组实验动物单位体重所给受试化学物的体积相同，剂量越大，受试化学物配制的浓度越高。 为避免操作误差，等容量稀释的传统方法常用1︰K系列稀释法（K=各组剂量比值）。 根据实验设计要求确定最高剂量组所需受试化学物的浓度和总体积，配制母液。 （3）等容量稀释法配制6个剂量组的染毒溶液 求母液浓度C1 绝对致死剂量为2500mg/kg，最低中毒剂量为800mg/kg，每10g体重小鼠灌胃0.2mL C1=2500mg/kg×10g/0.2mL＝125mg/mL 求公比r √ b a 6-1 √ 2500 800 =1.25 r一般为1.2-1.5 n为组数 r= = n-1 式中，K：各组剂量的比值，K＝1/r。 取母液m mL置一容器中，供最高剂量组染毒用；加入m mL溶剂，稀释后的浓度为C2，C1︰C2＝1︰K，取出m mL供第二组动物染毒用；再加入m mL溶剂，稀释后的浓度为C3，C2︰C3＝1︰K，取出m mL供第三组动物染毒用。依次类推，配制其它不同剂量组的试液。 设：母液浓度为C1，各组所需要的量为m mL，母液应配制的总量M为： 各组剂量比值K＝1/r＝0.8 母液总量：M＝m/(1-K)＝10/(1-0.8)=50mL 受试化学物的质量为：125mg/mL×50mL＝6.25g 求母液应配制的总量 称取盐酸二甲硝咪唑6.25g，用生理盐水或蒸馏水将药物溶解并稀释至50mL，即为母液(母液浓度为125mg/mL)； 从母液中取10mL供第1组动物染毒； 在剩下的母液中加入10mL溶剂，稀释后 取10mL供第2组染毒； 依次类推，配制其它不同剂量组的试液。 药物溶液的配制 4. 灌胃给药 （1） 动物的禁食和复食：灌胃前禁食6～10h，使动物保持空腹状态，且不至因禁食时间过长影响肝脏，进而影响实验结果。灌胃后至少2～3h后才能复食，灌服油剂比水剂要求复食时间更长； （2） 灌胃体积：小鼠每10g体重灌胃0.1～0.2mL，最多不超过0.4mL。小鼠灌胃量的极限是0.5～1mL； （3） 灌胃方法和注意事项。 小鼠经口灌胃给药方法 保定动物：用右手将小鼠尾巴提起，置于