兽医免疫学-实验九（2）新城疫抗体水平评估—综合.ppt

鸡群对NDV的免疫状态评价标准 按一定比例抽查（20-30份血清或枚鸡蛋） HI≧24，鸡群有免疫力。 HI ≧26，成年鸡群有免疫力。 HI ≧28，对非典型ND有免疫力 HI效价参差不齐（HI≦23和HI ≧ 212并存）， 鸡群被感染过（疫苗免疫很少出现HI ≧ 212 所有检测的抗体水平HI ≧ 212，说明感染过或感染正在发生。 二、实验内容 血清样品的采集 抗体效价的测定（HA和HI）实验 HA实验得到NDV效价，配置8U和4U病毒液； HI实验得到被检鸡血清的抗体效价。 据HI检测结果，分析鸡群的免疫状态 实验二 鸡群新城疫抗体水平检测 某鸡场免疫新城疫疫苗后，免疫效果须进行评估，请用免疫学技术检测鸡群抗体效价，据测定结果评估免疫效果。 1. 鸡新城疫病毒 (弱毒株Lasota）液 2. 鸡红细胞：用生理盐水配成1%悬液 3. 抗凝剂：3.8%柠檬酸三钠缓冲液 4. 活鸡 5. V型血凝板、微量移液器，微量振荡器等 一、实验材料 作业 完成实验报告, 据所得结果说明鸡群的免疫状态，评价疫苗的免疫效果。 附：实验方法 （一）鸡血清分离 (1)右手持注射器，左手将家禽双翼提起，露出翼静脉的采血位置，把覆盖血管的羽毛拔开，即可见到明显一条较粗的静脉血管； (2)用酒精棉球将采血部位消毒。采血时用左手大拇指夹住覆盖静脉的羽毛，食指协调大拇指夹住双翼，中指、无名指和手掌轻轻提起或轻按背部保定鸡只，待其安静方可刺针； (3)针头由翼根部向翅膀方向沿静脉平行刺入血管,见有少量回血即可采集血液，采血完成后马上用手压迫伤口止血； (4)采血完成后，将注射器栓塞向后拉少许，以保证针筒内有足够的空间析出血清； (5)将注射器放入37℃温箱1-2小时； (6)将注射器放入4℃冰箱2小时以上或过夜,血清即可析出，仍未析出者，3000转离心10分钟，取上清即为血清。 弃50 1．做标记； 2．加生理盐水； 3. 第1孔加NDV，然后倍比稀释； 4．加红细胞； 5．立即振荡2min，静置20－30min； 6. 观察结果。 ++++为全部血球发生凝集，呈颗粒状薄膜铺于孔底； +++约有75％血球发生凝集； +约有25％血球发生凝集； ++约有50％血球发生凝集； －不凝集，表现为血球沉于孔底，呈一致密小圆点，与对照孔相同。 （二）血凝试验（HA） 结果判定 以红细胞凝集50％的稀释度作为判定终点； 以50％鸡红细胞凝集（++）的最高病毒稀释倍数 作为该病毒的血凝价。 将血凝价规定为1个血凝单位（U）。 血凝单位的计算方法： 以血凝价为29(512x)为例 8U=8×1/512=64x,即将原病毒稀释64倍； 4U=4×1/512=128x,即将原病毒稀释128倍. 将血凝价规定为1个血凝单位（U）。 （三）血凝抑制试验（HI） 弃50μL 以抑制50％鸡红细胞凝集的血清稀释度作为判定终点； 以抑制50％鸡红细胞凝集（++）的最高血清稀释倍数作为该血清的血凝抑制价。 结果判定