兽医免疫学-实验六 胶体金免疫层析技术.ppt

胶体金免疫层析技术 （colloidal gold immunochromatography assay, GICA） 产生年代：20世纪80年代 产生的基础：ELISA、单克隆抗体技术、胶体金免疫技术和新材料技术。 技术优势：携带方便、操作简单、检测快速、灵敏度高、结果清晰、肉眼判定、无需特殊设备、无污染等优点。 应用：疾病诊断、药物残留分析、早孕检测等 一、胶体金免疫层析技术简介 类别 应用领域 检测的物质 人类医学 各级医院 家庭自检 商检系统 边检口岸 公安系统 传染病（乙肝五项/HIV/SARS等） 标志物（粪便血红蛋白等） 女性妊娠(hCG等) 毒品（吗啡,摇头丸,冰毒） 农牧业 畜牧兽医站 商检系统 边检口岸 农牧类院系和研究所 传染病（禽流感/链球菌等） 病毒（烟草花叶病毒/犬细小病毒等） 环境 环保监测部门 研究机构 有害物质超标 食品安全 食品安全检测中心 各监管部门 农兽药残留（磺胺类/瘦肉精等） 大肠杆菌 黄曲霉素 胶体金（colloidal gold）：金盐被还原成原子金后形成的金颗粒悬液。 核心技术-胶体金 胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附功能，可与蛋白质（葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白）等非共价结合，又不破坏被结合物原有的生物活性，被结合者被红色的金原子示踪。 Au Ab 衬板（PVC） 样品垫 金标垫 吸收垫 硝酸纤维素膜 二、胶体金免疫层析试纸条 （一）试纸条构成 （二）试纸条的一般工作原理 夹心法 C 阴性 B 阳性 （三）试纸条具体的原理 间接法 C 阴性 B 阳性 阴性 弱阳性 阳性 竞争抑制法 理解试纸条检测禽流感抗体（大分子）及磺胺嘧啶（小分子）的原理，撑握试纸条操作方法及结果判定方法 实验三 免疫层析试纸条检测 生物大分子和小分子 一、实验目的 间接法检测AIV野毒感染抗体 C 阴性 B 阳性 二、实验原理 阴性 弱阳性 阳性 竞争抑制法检测磺胺嘧啶残留 检测线颜色强度与SD浓度负相关 1、禽流感抗体检测试纸卡 2、禽流感抗体阳性对照样品（field-infect+) 3、禽流感抗体阴性对照样品(vacc-) 4、被检样品(Ab待检） 5、磺胺嘧啶残留检测试纸卡 6、磺胺嘧啶残留阳性对照样品（SD+） 7、磺胺嘧啶残留阴性对照样品（PBS） 8、被检样品（SD待检） 三、实验材料 将被检样品及对照样品加入分别试纸卡样品孔中，100 μL/孔，静置5min后观察结果。 四、实验方法 五、结果判定 1、禽流感抗体检测试纸卡 试纸卡上出现两条红线，判阳性； 试纸卡上出现一条质控红线，判阴性； 无红线，试纸卡失效。 2、磺胺嘧啶残留检测试纸卡： 试纸卡上出现两条红线，判阴性； 试纸卡上出现一条质控红线，判阳性； 无红线，试纸卡失效。