动物生物技术第四章 动物胚胎工程.ppt

（2） 细胞质的成熟 显著的蛋白质合成发生在生发泡破裂前后，这些新合成的蛋白质不仅与卵细胞自身成熟有关（激活成熟促进因子），而且与卵母细胞输精后的发育能力直接有关，所以细胞质成熟的质量如何直接影响到早期胚胎的发育能力 胞质成熟主要表现为细胞器变化和纺锤体的形成 卵母细胞成熟后期细胞器完成重新组装，如高尔基体消失，线粒体分布核的周围，胞质内有PAS阳性的囊膜和脂滴 （3）细胞膜和透明带的成熟 细胞膜稳定性发生改变，膜微绒毛发生重排，表现密集而有弯曲，并从透明带内退出或断裂 透明带外层呈网状，变软 2、体外获能 指精子在体外获得受精能力的过程 包括在体外环境中除去精浆和精子表面吸附的大分子物质，减少表面阴性电荷，提高膜流动性，增加精子呼吸率和加快运动幅度等一系列生理生化过程 精子体外获能是体外受精技术的关键环节，主要包括精子的洗涤和添加特定成分 Brackett（1982）以高离子强度液处理使精子获能 钙离子在精子获能时起关键作用，能较快的诱发精子超活化运动和顶体反应 氨基多糖（GAGs）是牛精子获能的主要物质，可促进对钙离子的吸收，诱发顶体反应。如肝素也可使精子获能，但同样是一个钙离子依赖的过程 血清白蛋白（BSA）也可诱发精子获能。可能作为Zn离子融合剂引起PLA2的表达，或者在获能中去除精子膜上的胆固醇 3、 体外受精 体外受精是以正常体内受精的研究为基础的，尽可能给精—卵提供一个适宜的共培养体系是研究体外受精的目的 受精成功的标志是看受精卵是否可发育至囊胚期阶段 多精子受精一直是体外受精的一个难点 显微操作辅助受精 透明带打孔技术(PZD) 卵透明带下注射技术(SUZI) 卵胞质内注射技术(ICSI) 4、受精卵的体外培养 受精卵要在体外条件下培养发育一段时间，再移植到受体子宫内，因此，“试管动物”实际上要在体外进行三个阶段的培养： 第一阶段是卵子成熟培养和精子获能培养 第二阶段是受精培养 第三阶段才是受精卵早期发育培养 5、存在的问题 体外受精的效率有待提高 体外培养体系有待进一步完善 基础理论研究有待加强 作业 1、概念 胚胎移植、超数排卵、同期发情、胚胎分割、发育阻断、体外受精、精子获能 2、简答 胚胎移植的生理学基础 胚胎移植的基本原则 牛胚胎移植基本程序 * * * 在畜牧生产中，家畜的超数排卵和胚胎移植通常同时应用，通常被称为MOET（multiple ovulation and embryo transfer）技术。 * 女性每个月只有一次排卵，最终只有一个卵泡能存活受精，其他没有受孕的卵泡会随着月经排出体外，每次排卵一般在下次月经到来前14天，排卵期前后极易受孕。 * * LH:luteinizing hormone (促黄体生成激素)，促性腺激素的一种，亦称促间质细胞激素（ICSH）：是由脑垂体前叶嗜碱性细胞分泌的，它作用于成熟的卵泡，能引起排卵并生成黄体。还可促进黄体、内荚膜和间质细胞分泌动情素。在雄性动物，它作用于睾丸的间质细胞促进其分泌雄性激素。 FSH（follicle-stimulating hormone，卵泡刺激素）：垂体前叶嗜碱性细胞分泌的一种激素。主要作用为促进卵泡成熟。人卵泡刺激素促进卵泡颗粒层细胞增生分化，促进整个卵巢长大。作用于睾丸曲细精管可促进精子形成。注射FSH只增加卵泡数目，对卵泡成熟并无作用。 Estrogen：雌激素，促进阴道、子宫、输卵管和卵巢本身的发育。 Progesterone：孕酮（黄体酮），为维持妊娠所必需 LH和FSH排卵峰与孕酮协同作用，激活卵泡液内蛋白溶酶活性，溶解卵泡壁隆起的尖端部分，形成排卵孔。排卵时随卵细胞同时排出的有放射冠、透明带及少量卵丘内的颗粒细胞。 * Zygote：受精卵；polar body：极体；morula：桑椹胚；blastocoele：囊胚腔；uterine wall：子宫壁 雌性生殖细胞在减数分裂过程中，减数第一次分裂，初级卵母细胞产生一个次级卵母细胞和一个极体，次级卵母细胞的体积较大，而极体较小。减数第二次分裂，次级卵母细胞产生一个卵细胞和一个极体，同时减数第一次分裂产生的极体也分裂成两个极体。综上，一个雌性生殖细胞减数分裂只能产生一个卵细胞，还有三个极体。初形成的极体位于卵的动物极，极体内细胞质极少，缺乏营养物质，很快即退化消失，从而保证卵细胞内大量胞质的贮备，以供早期胚胎发育的需要。 * Prereceptive：预接受的；Receptive：接受的；attachment：附着；decidualization：蜕膜化； catecholestrogen：儿茶酚雌激素 * * 胚胎移植过程中，供体胚胎发育阶段与受体子宫发育状况必须高度对应， * * 对猪而言，传统的做法是用输胚管从输