临床免疫学—免疫浊度法测免疫.ppt

免疫球蛋白A、M的检测 临床免疫教研室 实验目的 掌握: 免疫浊度方法的操作步骤和注意事项； 熟悉: 临床测定免疫球蛋白的临床意义 实验原理 属于液相沉淀反应;　 抗原抗体在合适缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度,从而引起反应体系吸光度的改变。当反应液中保持抗体过量时，形成的复合物随抗原量增加而增加，反应液的浊度亦随之增加，与一系列的标准品对照，即可计算出待测抗原的含量。 透射免疫比浊法 散射免疫比浊法 速率比浊法 终点比浊法 实验试剂与材料 1. 反应液； 2. 抗免疫球蛋白血清； 3. 标准品； 4. 待测样品； 5. 吸管， 移液器， 枪头 实验步骤 1. 准备好试管、枪头 17支试管：（4个标准品+1个待测标本）*3+1个试剂空白对照 +5个样本空白对照 2．按下表进行操作。 先准备好所有工作液,再加标准品和待测样品。 3.混匀各管，37℃保温10min，波长340nm，分别测出各管吸光度(A)。 4.根据吸光度和标准品浓度绘制标准曲线,再根据标准曲线求出样品浓度。 IgA：0，0.6，1.5，3，4.5g/l IgM：0，0.6，1.15，2，3g/l 操作步骤 管号 空白管 标准管1 标准管2 标准管3 标准管4 标本管 样品空白管 工作液(ml) 3 3 3 3 3 3 蒸馏水(μl) 30 3ml 标准品1 (μl) 30 30 标准品2(μl) 30 30 标准品3(μl) 30 30 37℃ 放置10分钟，340nm波长以试剂空白管调零，读取吸光度值。 以吸光度为纵坐标，标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线。 将样品管吸光度代入所绘制的标准曲线, 反求出样品浓度。 标准品4(μl) 30 30 待测标本(μl) 30 30 注意事项和影响因素: 每个标本做3个重复; 加样要准确, 速度要快; 试剂/标本要混匀; 抗体质量: 特异性, 类型(R/H); 抗原和抗体的比例: 钩状效应? 反应条件: pH值, 离子强度, 离子类型; 增浊剂的应用: 聚乙二醇( PEG8000), Tween-20 标本因素: 高血脂, 黄疸，溶血，内源性免疫复合物, 单克隆丙种球蛋白 思考题 1.免疫球蛋白分为哪几类？其增加或减少都有哪些临床意义? 2.免疫比浊法还能检测哪些临床指标? 3.测定血清免疫球蛋白还有哪些方法,不同方法间有何异同? * * * * * * * * * * * * * * * * * *