兽医产科_实验二 精液检查乳汁检查.ppt

4. 过氧化氢酶法（H2O2） 此法为间接测定乳中白细胞的方法，即测定乳中白细胞的过氧化氢酶，以推断白细胞的含量。 （1）试剂：双氧水（30%），按1:2.33—4的比例加入中性蒸馏水，配成6-9%的试剂，待用。 （2）方法：将载玻片置于白色衬垫物上，滴备检乳1滴，再加过氧化氢试剂1滴，混合均和，静置2min观察。 H2O2诊断乳房炎的判断标准 反应 判定 符号 液面中心无气泡，或有小如针尖的气泡聚集 正常乳 － 液面中心有少量大如粟粒的气泡聚集 可疑乳 ± 液面中心布满或有大量粟粒大的气泡聚集 感染乳 ＋ 5. 微生物学检测： 对乳汁的病原微生物进行分离培养和鉴定，并与患牛的临床症状和乳汁的性状结合起来，判定乳房炎的发生情况。如在乳汁中分离到无乳链球菌、金黄葡萄球菌、大肠杆菌或霉形体时，就要注意这些病原可能与牛群的乳房炎发生有关系。但需要指出的是，有些隐性乳房炎不能在乳汁中检出病原菌，而有些病原菌经常存在于乳房内，检出时牛只不一定发病。因此根据乳汁中有无病原菌来判断奶牛是否患有乳房炎需要综合分析。 6、乳汁理化性质的检测： 6.1 乳汁PH值检查法：研究证实当发生乳房炎时，乳汁的PH值升高，升高的程度取决与炎症的程度。因此通过检测乳汁PH值的方法可以检测乳房炎。乳汁中的PH值:正常6.2-6.5; 可疑:6.6;6.6以上为阳性. 6.2乳汁导电性检查法：当奶牛发生乳房炎时其乳汁中的离子浓度升高，进而表现为导电性的增加，因此，通过检测牛奶导电性的变化可以用于乳房炎的诊断。但不同的个体及不同的饲养管理状况，乳汁电导率变化较大，因此判断隐性乳房炎的关键是确定不同牛群正常乳汁的阈值。目前国内外有很多基于这一原理的奶牛乳房炎电子诊断仪，实现对奶牛乳房炎及牛奶形状的快速、综合检查。 体细胞数为 2 0万～5 0万个/m L时，乳汁的电导率为0.40～0.50 mho/m； 体细胞数为 5 0万～150万个/m L时，乳汁电导率为 0.50～0.55mho/m； 体细胞数为 150万～500万个/mL时，乳汁电导率为 0.55～0.625mho/m； 体细胞数大于500万个/mL 时，乳汁电导率在0.625mho/m 以上。 作 业 每组以表格形式将精液和乳汁检查结果汇总， 实验二 精液检查 乳汁检查 第一部分：精液检查 实验目的 对精子解冻后的精子进行检测； 进行精子染色及精子活体检查，对精液质量进行评估。 实 验 材 料 1、牛冷冻精液 2、意大利精子密度测定仪 3、精子活体检测试剂盒 4、PH试纸 5、牛输精枪 一、牛冷冻精液解冻 解冻方法：冻精使用前必须预复温解冻，而解冻后精子复苏率高低，关键取决于解冻温度； 解冻时，还要做到三快，即快取、快投、快融解。 1、打开水浴锅，调整温度为37-40 ℃； 2、打开液氮罐，马上用长把镊子向外提取冻精； 3、立即投入已加温的水浴锅中，边溶化边摇晃试管5～10秒； 4、迅速将试管取出水面，再继续摇晃到全部溶化。 采用上述方法，解冻后的精子活力好，存活时间较长。如果待溶化完再将试管取出水面，精子则迅速死亡。　　　　精液解冻后最好立即输精，不宜保存太久，一般不得超过2小时。否则，精子活力显著降低而影响受胎率。为做到解冻后快输精，最好待母牛保定好后再进行解冻。 二、牛冷冻精液活率检测 精液解冻后立即在35-37度的玻片上进行检测； 【实验步骤】： 1、用移液器蘸取一滴被测精液，； 2、如果密度大可滴加一滴稀释液，加盖玻片，避免出现气泡； 3、置于100-400倍显微镜下观察精子运动情况； 【实验结果】：记录 精子活率指的是直线前进的运动精子占总精子数的比例。 精子活率（%）= 直线前进运动精子数/总精子数*100 十级评分标准：100%为1.0级；90%为0.9级，以此类推。 三、精子死亡率检测 伊红染色法 通过检测精子膜的完整性来评价精子的存活率。通过染料拒染法鉴别细胞膜完整的精子，从而得出精子的百分率。染料拒染法是基于损伤的细胞膜可以允许非透过膜性染料进入膜内染色。 【原理】 【试剂与材料】 伊红溶液 【检验方法与步骤】 1、取一滴精液和伊红溶液置于载玻片混匀； 2、然后盖上盖玻片； 5、马上镜检，计数染色精子和非染色精子，并计算存活率。 【结果观察】 1：活精子头部呈白色，死精子头部呈红色。一般将头部呈淡粉红色的判为活精子。 2：如果染色只限于颈部区域，头部的其余区域未染色，这种情况应该是：颈部膜渗漏，一般情况下这不是精子死亡和整个精子膜破裂的征象，故判为活精子。 【样本要求】 精液标本最好在30mi