一代测序与二代测序的区别与联系.docxVIP

第代第一代第一代 第 代 第 一 代 第 一 代 一代测序与二代测序的区别与联系 Sanger 法测序（一代测序） Sanger 法测序利用一种 DNA 聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种 链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成，每个反应含有所有四种 脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)， 并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于 ddNTP 缺乏延伸所需要的 3-OH 基团，使延长的寡聚核苷酸选择性地在 G、A、T 或 C 处终止。终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种 dNTPs 和 ddNTPs 的相对浓度可以 调整，使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。它们具有共同的起始点，但终止 在不同的的核苷酸上，可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段，凝胶处理后可 用 X-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。 高通量测序（二代测序） 高通量测序技术（High-throughput sequencing，HTS）是对传统 Sanger 测序（称为一代测 序技术）革命性的改变, 一次对几十万到几百万条核酸分子进行序列测定, 因此在有些文献 中称其为下一代测序技术(next generation sequencing，NGS )足见其划时代的改变, 同时高 通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能, 所以又被称为 深度测序(Deep sequencing)。 第一代和第二代测序技术 X 公司 平台 名称 测序方 法 检测 方法 大约 读长 (碱基 数) 优点 相对局限性 ABI/ 生命 技术 公司 3130 xL- 3730 xL 桑格- 毛细管 电泳测 序法 荧光/ 光学 600- 1000 高读长，准确度 一次性达标率高， 能很好处理重复 序列和多聚序列 通量低；样品制 备成本高，使之 难以做大量的平 行测序 贝克 曼 GeXP 遗传 分析 系统 桑格- 毛细管 电泳测 序法 荧光/ 光学 600- 1000 高读长，准确度 一次性达标率高， 能很好处理重复 序列和多聚序列； 通量低；单个样 品的制备成本相 对较高 第二代第二代第二代第二代 第 二 代 第 二 代 第 二 代 第 二 代 易小型化 罗氏 /454 基因 组测 序仪 FLX 系统 焦磷酸 测序法 光学 230- 400 在第二代中最高 读长；比第一代 的测序通量大 样品制备较难； 难于处理重复和 同种碱基多聚区 域；试剂冲洗带 来错误累积；仪 器昂贵 以鲁 米那 HiSeq 2000/ miSe q 可逆链 终止物 和合成 测序法 荧光/ 光学 2x15 0 很高测序通量 仪器昂贵；用于 数据删节和分析 的费用很高 ABI/S OLiD 5500 xlSOL iD 系 统 连接测 序法 荧光/ 光学 25-35 很高测序通量； 在广为接受的几 种第二代平台中， 所要拼接出人类 基因组的试剂成 本最低 测序运行时间长； 读长短，造成成 本高，数据分析 困难和基因组拼 接困难；仪器昂 贵 赫利 克斯 Helis cope 单分子 合成测 序法 荧光/ 光学 25-30 高通量；在第二 代中属于单分子 性质的测序技术 读长短，推高了 测序成本，降低 了基因组拼接的 质量；仪器非常 昂贵 ----资料来源于文献：尹银亮、陈会平、毛良伟《新一代 DNA 测序技术总 览》