章细胞重组和克隆技术.pptxVIP

第一节 细胞重组;细胞拆合：把完整细胞的细胞核与细胞质用特殊的方法分离开来，或把细胞核从细胞质中吸取出来，或用紫外线等把细胞中的核杀死，然后再把同种或异种的细胞核和细胞质重新组合起来，培育新的细胞或新的生物个体。 ? 细胞重组：细胞融合技术与细胞核质分离技术结合，在融合介质作用下，使胞质体与完整细胞合并，重新构成胞质杂种细胞的过程。;胞质体（cytoplast）：除去细胞核后由膜包裹的无核细胞，由细胞松弛素B处理后，经离心得到。 如1972年，Prescott借助细胞松弛???和高速离心得到 核体（karyoplast）：由胞质体分离出来的核，带有少量胞质并围有质膜的结构。 胞质杂种细胞：将胞质体和另一完整细胞融合得到的细胞。 杂种细胞：核体与完整细胞融合。 重组细胞：核体与另一种细胞的胞质体融合。 ;利用细胞融合技术得到的重组细胞;微细胞：只有一条或几条染色体和一薄层细胞质，外面包裹一层完整的细胞质膜的核质体。 利用秋水仙素先将细胞阻断在染色体中期，然后培养，再用细胞松弛素B处理得到。 ? 以微细胞作供体，通过与遗传性完整的受体细胞融合，可以将微细胞内所含有的几条染色体转移到受体细胞中去。;微细胞杂种细胞的制作过程;三、细胞核移植;非洲爪蟾制作;我国的研究;哺乳动物核移植;核移植小鼠;四、细胞重建; 第二节 克隆技术; 1、克隆的定义 “克隆”是从英文“clone”音译而来，它是利用细胞工程技术通过动物或植物的一个细胞而发育成的一个完整的个体。该个体并非是供体动物（体细胞提供者）的后代而是它的拷贝——即复制品。; 多细胞生物体的每一个体细胞的细胞核内均还有发育成该生物体完整个体的所有遗传信息（染色体基因组），也就是说多细胞生物体的每一个体细胞都具有发育成完整个体的潜能，这就是细胞的全能性，也是克隆的理论基础。 ;理论依据：克隆技术所依赖的理论基础是细胞潜在全能性学说，是指细胞包含个体的全套遗传信息，并在特定环境因素的调节下，可回到受精卵一样的状态，并从头开始发育成一个完整的生物个体。只有具备全能性的动物组织细胞，才可用作克隆动物。 高等动物的大部分细胞核完整地保存着源于卵子和精子细胞核的全套遗传信息。;理论基础—在动物的发育过程中，具有全能性的受精卵需要不断分裂形成分化细胞。在细胞分化过程中，细胞核全能性的潜能不断得到限制。尽管核内的DNA序列没有发生任何变化，但是基因在特定的细胞内所表达的蛋白质成分是有限的。这主要是因为染色体组织改变和稳定阻遏核蛋白复合体阻遏以及相应转录激活的结果。这就是发育生物学中的渐成调控机制。对于发育来讲，这种阻遏作用是必要的。 体细胞克隆的成功，意味着卵子或卵母细胞逆转这种阻遏的过程,解除核组织的阻遏状态，使其恢复多能性，甚至全能性。;二 克隆技术的发展概况;??1998年7月22日：科学家采用一种新克隆技术，用成年鼠的体细胞成功地培育出了三代共50多只克隆鼠，这是人类第一次用克隆动物克隆出克隆动物。; 2000年3月14日：曾参与克隆小羊多莉的英国PPL公司宣布，他们成功地培育出5只克隆猪，这是人类首次培育出克隆猪。 ; 2001年1月，美国克隆猴成功，这只恒河猴被命名为“泰特拉”，这意味着克隆人已不存在技术障碍。 ; 2002年3月30日法国农业研究所的科学家在《自然生物技术》杂志上发表研究报告，宣布首批克隆兔已经诞生。 ; 2002年3月,美国科学家克隆成功猫. ; 2002年10月 中国农业大学采用胚胎冷冻技术获得的3头体细胞克隆牛。;2003年5月29日华盛顿消息，爱达荷大学的研究人员日前成功的在世界上首次克隆成功出一头被命名为“爱达荷宝石”的骡子，这项成果发表在《科学》杂志上。骡子是母马与公驴的杂交物种，这也是人类第一次成功克隆杂交物种。 ;2003年8月6日，意大利科学家，克雷莫纳市繁殖技术与家畜饲养实验室克隆马科研小组负责人切萨雷·加利博士宣布，世界上第一匹克隆马诞生。这是继克隆骡子出世之后克隆技术的又一大突破，也是世界上首例哺乳动物生下它自己的克隆体。;中国克隆出世界著名医用小型猪 已成功存活9天 2007年06月03日 06:42 来源：新华网 ;三 克隆的技术方法;1、细胞核移植;用紫外光照射受精卵，破坏原来的细胞核； 取得另一个细胞的细胞核； 再用极细的玻璃针，重新将新的细胞核植入卵中。 其中破坏卵细胞核的目的是为了避免当细胞融合后，不会因为存有多余的染色体而影响细胞正常的生长及分裂。;2、克隆动物的一般制备技术;胚胎细胞核移植法;胚胎干细胞核移植; ES细胞具有体外发育的全能性，并且可以在体外无限传代，因此，它是动物克隆的理想供体细胞。 E