高中生物12基因工程的基本操作程序 新人教版选修.pptxVIP

1.2 基因工程的基本操作程序原核细胞的基因结构非编码区编码区非编码区编码区下游 编码区上游 终止子启动子与RNA聚合酶结合位点能转录，编码蛋白质编码区：非编码区：不编码蛋白质,能调控遗传信息表达真核细胞的基因结构编码区非编码区非编码区编码区上游 编码区下游 终止子启动子与RNA聚合酶结合位点内含子 外显子 能编码蛋白质的序列外显子： 编码区：内含子： 不能编码蛋白质的序列非编码区：基因的结构非编码区编码区非编码区原核启动子真核RNA聚合酶结合位点终止子外显子内含子原核细胞与真核细胞的基因结构比较原核细胞真核细胞不同点编码区是_____的编码区是间隔的、_____的相同点都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的不连续连续编码区非编码思考编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？山西省孝义市第二中学 基因工程的基本操作程序目的基因的获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定操作过程供体生物细胞取出DNA用限制酶剪去多余部分目的基因目的基因的获取即：将需要的基因从供体生物细胞内提取出来编码蛋白质的基因 目的基因主要是指______________________　目前被广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、植物抗病基因（抗病毒、抗细菌)、人胰岛素基因等。也可以是一些具有调控作用的因子基因组文库：种类：部分基因文库：(如cDNA文库)获得目的基因的方法 从基因文库中获取目的基因未知序列1.什么是基因文库？2.怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因？含有一种生物的全部基因含有一种生物的部分基因根据基因的有关信息：如基因的转录产物mRNA基因的核苷酸序列等利用PCR技术扩增目的基因人工合成 已知序列 基因较小已知序列(二)基因表达载体的构建—— 核心1.用一定的_________切割 质粒，使其出现一个切 口，露出____________。2.用_____________切断目 的基因，使其产生_____ ____________。限制酶黏性末端同一种限制酶相同的黏性末端切口3.将切下的目的基因片段插入质粒的______处， 再加入适量___________，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒）DNA连接酶(二)基因表达载体的构建—— 核心质粒DNA分子4.过程:同一种限制酶处理一个切口两个黏性末端两个切口获得目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）资 料: 科学家在培育抗虫棉时，经过了许多复杂的过程和不懈的努力，才获得成功。 起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。 然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗虫基因首端)，导入棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入终止子(抗虫基因末端)，导入棉花受精卵，结果成长的植株，有了抗虫能力。 a、目的基因b、启动子c、终止子d、标记基因基因表达载体的组成：目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。(三)将目的基因导入受体细胞常用的受体细胞：动植物细胞、大肠杆菌、土壤农杆菌、枯草杆菌等。将目的基因导入受体细胞的原理：借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。受体细胞目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程转化——稳定表达(三)将目的基因导入受体细胞农杆菌转化法基因枪法导入植物细胞花粉管通道法方法——显微注射法导入动物细胞—— 感受态细胞吸收DNA分子导入微生物细胞(四)目的基因的检测与鉴定——检查是否成功①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因方法——DNA分子杂交检测—②检测目的基因是否转录出了mRNA方法——分子杂交③检测目的基因是否翻译成蛋白质方法——抗原-抗体杂交鉴定—抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等2. 构建基因文库①直接分离法:将含有某种生物不同基因 的许多DNA片断，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。用限制酶切成许多片断2. 构建基因文库①直接分离法：供体细胞中的DNA限制酶许多DNA片段分别与 载体连接运载体分别 导入受体细胞2. 构建基因文库②反转录法：mRNA 反转录cDNA(互补DNA） DNA聚合酶双链DNAcDNA合成过程 第一步，反转录酶以RNA为模板合成一条与RNA互补的DNA单链，形成RNA-DNA杂交分子。第二步，核酸酶H使RNA-DNA杂交分子中的RNA链降解，使之变成单链的DNA。第三步，以单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下合成另一条互补的DNA链，形成双链DNA分子。 基因组文库：一般针对原核生物的基因，因为基因少部