13、14日下午欧阳能太-NGS在肿瘤分子诊断中的应用及遗传咨询1.pdf

NGS在肿瘤分子诊断中的应用 及遗传咨询 中山大学孙逸仙纪念医院 细胞分子诊断中心 欧阳能太 2018.01.13 广州 NGS基本原理 NGS基本流程 NGS与肿瘤遗传基因检测 什么是NGS • 概念  二代测序(Next-generation sequencing, NGS)又叫 高通量测序(High-throughput sequencing)，是 指能一次并行对几十万到几百万上亿条DNA分 子进行序列测定的测序技术，是相对于sanger 法等一代测序而言的，最大的特点是测序的通 量更高。 • 临床基因检测常用方法  qPCR、FISH、基因芯片法、质谱  一代测序、二代测序 DNA半保留复制与体外PCR扩增 测序基本原理 H+ 测序基本原理 可逆阻断合成技术 基因测序方法 • 第一代测序技术 – 1977年Maxam-Gilbert 化学法测序 – 1977年Sanger测序 – 1992年Lynx Therapeutics MPSS （大规模平行测序技术） – 2003年Polony Sequencing(乳化PCR, 聚合酶群落,Polony芯片) • 第二代测序技术 – 2005年Roche/454 （第一个NGS） – 2006年Illumina/Solexa – 2007年ABI/SOLiD – 2010年Life/Ion torrent – 华大/BGISeq （Complete Genomics ） Jonathan Rothberg 一代测序-Sanger法 dATP ddATP dGTP ddGTP 模板链 3’-…GACTAGATACGAGCGTGA…-5’ dCTP ddCTP 合成链 5’-…CTGAT dTTP ddTTP …CTGATC …CTGATC …CTGATCTAT …CTGATCT …CTGATCTATG …CTGATCTA …CTGATCTATGCTC 毛细管 …CTGATCTAT 电泳 …CTGATCTATG …CTGATCTATGCT …CTGATCT …CTGATCTATGC …CTGATCTATGC …CTGATCTATGCT …CTGATCTA 末端终止法 …CTGATCTATGCTC NGS基本原理-Illumina 文库制备-加接头 NGS基本原理-Illumina 文库制备-簇生成 NGS基本原理-Illumina NGS基本原理-Illumina NGS基本原理- Life/Ion Torrent NGS基本原理- Life/Ion Torrent