金黄色葡萄球菌的检验.pptxVIP

第六章 金黄色葡萄球菌检验雪印牛奶中毒事件人民日报（记者于青 管克江）报导　6月底以来，日本关西等地区发生特大食品中毒事件，截至6月30日晚间，因喝下有问题的雪印牌低脂肪牛奶而产生上吐下泻、腹痛等不适症状的患者人数为4891人，到7月1日中午，中毒人数已经超过5000人！且受害范围 也由原来的5个行政区域扩大至8个。这是战 后日本发生的规模最大的一起食品中毒事件。 7月2日，大阪府公共卫生研究所证实，从患 者饮用剩余的雪印牛奶中检查出了金黄色葡 萄球菌，这种葡萄球菌导致A型肠毒素滋生， 该毒素可造成饮用者腹泻、呕吐及全身不适。牛奶被污染原因何在？一、金黄色葡萄球菌的生物学特性　1、形态与染色：(staphylococcus aureus)? 金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，不运动　典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8 mm左右，显微镜下排列成葡萄串状。　　革兰氏染色阳性??　附：金黄色葡萄球菌的显微照片　金黄色葡萄球菌的染色照片　金黄色葡萄球菌的扫描电镜照片　金黄色葡萄球菌的透射电镜照片 金黄色葡萄球菌的显微照片? 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8 mm左右，显微镜下排列成葡萄串状。 ?? 金黄色葡萄球菌革兰氏染色显微照片?　　金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜　革兰氏染色阳性 ??金黄色葡萄球菌的扫描电镜照片Staphylococcus aureus Enhanced sem w: 7.9 micron ??金黄色葡萄球菌的透射电镜照片Tem x12000 digitized Staphylococcus aureus ??2、培养特性： 金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，加少量葡萄糖或血液生长更旺盛。需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃，最适生长pH 7.4　　金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在7.5～15%NaCl肉汤中生长。　3、生化特性：　可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。　许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。　金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。金黄色葡萄球菌的致病性　金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：a.溶血毒素：外毒素，分α、β、γ、δ，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死；b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞；c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。 葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关；d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌；e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E及F六种血清型。 *金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。肠毒素形成条件：　√存放温度，在37℃内，温度越高，产毒时间越短； √存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素； √食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。 ＊＊＊当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食品，如牛奶和乳制品、肉、蛋等，在温度条件适宜时，经过8～10小时即可产生相当数量的肠毒素，肠毒素可耐受100℃煮沸30分钟而不被破坏。人摄食该菌污染的食物2～3h后可引起中毒症状，它引起的食物中毒症状是呕吐和腹泻。　金黄色葡萄球菌的流行病学特点　季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。　金黄色葡萄球菌的检验GB4789.10-2010√第一法：金黄色葡萄球菌的定性检测√第二法：金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板计数√第三法：金黄色葡萄球菌MPN计数金黄色葡萄球菌的定性检验检样增菌（7.5％氯化钠肉汤或10％氯化钠胰酪胨大豆肉汤）BP平板，血平板涂片染色观察溶血BHI肉汤和营养琼脂血浆凝固酶实验报告金黄色葡萄球菌的检验1、样品制备　按无菌操作取检样25 g（mL），加入225 mL灭菌生理盐水，固体样品研磨或置均质器中制成1:10样品混悬液。 　供计数检验时，可按十进位递增稀释法将样品匀液再进行适当稀释。金黄色葡萄球菌的检验2、增菌及分离培养 吸取5 mL混悬液，接种于7.5%氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤50 mL培养基内，36℃±1℃培养24 h，转种血平板和Baird-Parker平板， 36℃±1℃培养24 h，挑取血平板上金黄色（有时为白色）菌落进行革